Canabinoides em Cannabis sativa L. e seus produtos: validação de método e análise por LC-MS/MS

Abstract

Nos últimos anos a Cannabis sativa L. passou de uma planta proibida para uma que está ganhando aceitação cultural e legal em muitos países para uso medicinal e recreativo. À medida que jurisdições legalizam os produtos à base de cannabis, a variedade e complexidade desses produtos ultrapassam o material vegetal seco. Embora existam numerosos compostos ativos na planta, os principais canabinoides de preocupação regulatória e de segurança são Δ9 - tetrahidrocanabinol (THC), canabidiol (CBD), Δ9 -ácido tetrahidrocannabinólico-A (THCA-A), ácido canabidiólico (CBDA) e o canabinol (CBN) que pode ser produto da oxidação do THC. Recentemente, a Anvisa retirou o CBD da lista de substâncias proibidas e o reclassificou para substâncias controladas, além de liberar a fabricação e comercialização de seus produtos medicinais. Por isso, métodos apropriados para quantificar os constituintes biologicamente ativos são fundamentais para garantir a segurança e a conformidade regulatória e monitoramento dos produtos destinados ao uso medicinal, como também na apreensão e combate ao tráfico de drogas. Nesse estudo, foi otimizado e validado um método por LC MS/MS para análise simultânea de CBD, CBDA, THC, THCA-A, CBN e ácido canabinólico (CBNA) em material vegetal e produtos oleosos à base de cannabis. A separação cromatográfica foi feita numa coluna Zorbax Eclipse Plus C18, eluição isocrática contendo 0,1% de ácido fórmico em acetonitrila e água (85:15). O sistema de espectrometria de massas foi com ionização por eletrospray (ESI+) e um analisador de massa triplo-quadrupolo adquirindo os dados no modo de monitoramento de reações múltiplas (MRM). Amostras de plantas secas e moídas (50 mg) foram extraídas com uma solução de acetonitrila e metanol (80:20), homogeneizadas , centrifugadas, filtradas e diluídas. As amostras de óleo homogeneizadas (12 mg) foram diluídas, agitadas e filtradas. As diluições foram ajustadas para a faixa de quantificação da curva de calibração (1,56 a 100 ng/mL) e injetadas no LC-MS/MS (API 3200, Sciex). O método foi validado utilizando amostra controle de Humulus lupulus para as amostras de planta e uma mistura de óleos de girassol, coco e azeite extravirgem como amostra controle para extratos oleosos. Ambas as matrizes foram fortificadas com os analitos e padrões internos (THC-d3, CBD-d3, CBN-d3 e THCA-d3). A linearidade das curvas de calibração em fase móvel foi demonstrada com coeficiente de regressão r² ≥ 0,99. Os limites de quantificação (LOQ) de THC variaram entre 0,015% para óleos e 0,09% para plantas, cumprindo os requisitos regulamentares para produtos à base de cannabis (≤ 0,2 % THC). O método validado foi aplicado com sucesso na análise de 23 óleos de cannabis, 4 amostras de haxixe e 114 amostras de material vegetal. Todos os óleos e haxixes continham canabinoides acima do LOQ e muitos tinham altos níveis de THC (máximo de 60,9%) e CBD (29,8%), enquanto apenas 15% das amostras tinham teor de THC ≤0,2%. Não há limite legal de THC para material vegetal, e os teores variaram entre partes das plantas, com as raízes apresentando menor e as inflorescências maior teor. O estudo revelou que os produtos dentro da mesma categoria podem apresentar variações nos perfis e níveis de canabinoides, indicando a necessidade de quantificação de canabinoides em produtos à base de cannabis, dado o atual cenário regulatório diversificado e em rápida mudança em todo o mundo.