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Título : Canabinoides em Cannabis sativa L. e seus produtos: validação de método e análise por LC-MS/MS
Autor : Drobnjak, Patricia da Silva Montes
Orientador(es):: Caldas, Eloisa Dutra
Coorientador(es):: Zacca, Jorge Jardim
Assunto:: Drogas
Canabinoides
Maconha
Fecha de publicación : 6-ago-2024
Citación : DROBNJAK, Patricia da Silva Montes. Canabinoides em Cannabis sativa L. e seus produtos: validação de método e análise por LC-MS/MS. 2023. 85 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.
Resumen : Nos últimos anos a Cannabis sativa L. passou de uma planta proibida para uma que está ganhando aceitação cultural e legal em muitos países para uso medicinal e recreativo. À medida que jurisdições legalizam os produtos à base de cannabis, a variedade e complexidade desses produtos ultrapassam o material vegetal seco. Embora existam numerosos compostos ativos na planta, os principais canabinoides de preocupação regulatória e de segurança são Δ9 - tetrahidrocanabinol (THC), canabidiol (CBD), Δ9 -ácido tetrahidrocannabinólico-A (THCA-A), ácido canabidiólico (CBDA) e o canabinol (CBN) que pode ser produto da oxidação do THC. Recentemente, a Anvisa retirou o CBD da lista de substâncias proibidas e o reclassificou para substâncias controladas, além de liberar a fabricação e comercialização de seus produtos medicinais. Por isso, métodos apropriados para quantificar os constituintes biologicamente ativos são fundamentais para garantir a segurança e a conformidade regulatória e monitoramento dos produtos destinados ao uso medicinal, como também na apreensão e combate ao tráfico de drogas. Nesse estudo, foi otimizado e validado um método por LC MS/MS para análise simultânea de CBD, CBDA, THC, THCA-A, CBN e ácido canabinólico (CBNA) em material vegetal e produtos oleosos à base de cannabis. A separação cromatográfica foi feita numa coluna Zorbax Eclipse Plus C18, eluição isocrática contendo 0,1% de ácido fórmico em acetonitrila e água (85:15). O sistema de espectrometria de massas foi com ionização por eletrospray (ESI+) e um analisador de massa triplo-quadrupolo adquirindo os dados no modo de monitoramento de reações múltiplas (MRM). Amostras de plantas secas e moídas (50 mg) foram extraídas com uma solução de acetonitrila e metanol (80:20), homogeneizadas , centrifugadas, filtradas e diluídas. As amostras de óleo homogeneizadas (12 mg) foram diluídas, agitadas e filtradas. As diluições foram ajustadas para a faixa de quantificação da curva de calibração (1,56 a 100 ng/mL) e injetadas no LC-MS/MS (API 3200, Sciex). O método foi validado utilizando amostra controle de Humulus lupulus para as amostras de planta e uma mistura de óleos de girassol, coco e azeite extravirgem como amostra controle para extratos oleosos. Ambas as matrizes foram fortificadas com os analitos e padrões internos (THC-d3, CBD-d3, CBN-d3 e THCA-d3). A linearidade das curvas de calibração em fase móvel foi demonstrada com coeficiente de regressão r² ≥ 0,99. Os limites de quantificação (LOQ) de THC variaram entre 0,015% para óleos e 0,09% para plantas, cumprindo os requisitos regulamentares para produtos à base de cannabis (≤ 0,2 % THC). O método validado foi aplicado com sucesso na análise de 23 óleos de cannabis, 4 amostras de haxixe e 114 amostras de material vegetal. Todos os óleos e haxixes continham canabinoides acima do LOQ e muitos tinham altos níveis de THC (máximo de 60,9%) e CBD (29,8%), enquanto apenas 15% das amostras tinham teor de THC ≤0,2%. Não há limite legal de THC para material vegetal, e os teores variaram entre partes das plantas, com as raízes apresentando menor e as inflorescências maior teor. O estudo revelou que os produtos dentro da mesma categoria podem apresentar variações nos perfis e níveis de canabinoides, indicando a necessidade de quantificação de canabinoides em produtos à base de cannabis, dado o atual cenário regulatório diversificado e em rápida mudança em todo o mundo.
Abstract: In recent years, Cannabis sativa L. has transitioned from being a prohibited plant to one that is gaining cultural and legal acceptance in many countries for both medicinal and recreational use. As jurisdictions legalize cannabis-based products, the variety and complexity of these products extend beyond dried plant material. While numerous active compounds exist within the plant, the primary cannabinoids of regulatory and safety concern are Δ9-tetrahydrocannabinol (THC), cannabidiol (CBD), Δ9-tetrahydrocannabinolic acid-A (THCA-A), cannabidiolic acid (CBDA), as well as cannabinol (CBN), which can result from THC oxidation. Recently, Anvisa removed CBD from the list of prohibited substances and reclassified it as controlled substances, while also allowing the manufacture and commercialization of its medicinal products. Therefore, appropriate methods for quantifying biologically active constituents are essential to ensure safety, regulatory compliance, and monitoring of products intended for medicinal use, as well as for drug seizure and combatting drug trafficking. In this study, an LC-MS/MS method was optimized and validated for the simultaneous analysis of CBD, CBDA, THC, THCA-A, CBN, and cannabinolic acid (CBNA) in plant material and oil-based cannabis products. Chromatographic separation was achieved using a Zorbax Eclipse Plus C18 column with isocratic elution containing 0.1% formic acid in acetonitrile and water (85:15). The mass spectrometry system employed electrospray ionization (ESI+), with a triple quadrupole mass analyzer acquiring data in multiple reaction monitoring (MRM) mode. Dried and ground plant samples (50 mg) were extracted with an acetonitrile and methanol solution (80:20), homogenized, centrifuged, filtered, and diluted. Homogenized oil samples (12 mg) were diluted, agitated, and filtered. Dilutions were adjusted within the calibration curve quantification range (1,56 to 100 ng/mL) and injected into the LC-MS/MS system (API 3200, Sciex). The method was validated using a control sample of Humulus lupulus for plant samples and a mixture of sunflower, coconut, and extra virgin olive oils as control samples for oil samples. Both matrices were fortified with analytes and internal standards (THC-d3, CBD-d3, CBN-d3, and THCA-d3). Calibration curve linearity was demonstrated in the mobile phase with regression coefficients r² ≥ 0.99. The quantification limits (LOQ) for THC ranged from 0,015% for oils to 0,09% for plants, meeting regulatory requirements for cannabis-based products (≤ 0.2% THC). The validated method was successfully applied to the analysis of 23 cannabis oils, 4 hashish samples, and 114 plant material samples. All oils and hashish contained cannabinoids above the LOQ, with many exhibiting high levels of THC (up to 60.9%) and CBD (29.8%), while only 15% of samples had THC levels ≤0.2%. There is no legal THC limit for plant material, and levels varied across plant parts, with roots displaying lower content and inflorescences higher content. The study revealed that products within the same category can exhibit variations in cannabinoid profiles and levels, highlighting the need for cannabinoid quantification in cannabis-based products, given the current diverse and rapidly changing regulatory landscape worldwide."
metadata.dc.description.unidade: Faculdade de Ciências da Saúde (FS)
Departamento de Farmácia (FS FAR)
Descripción : Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2023.
metadata.dc.description.ppg: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas
Agência financiadora: Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Aparece en las colecciones: Teses, dissertações e produtos pós-doutorado

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