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Veuillez utiliser cette adresse pour citer ce document : http://repositorio.unb.br/handle/10482/49165
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2023_VanessaDaSilvaEschimith_DISSERT.pdf1,57 MBAdobe PDFVoir/Ouvrir
Titre: Avaliação da epiisopilosina, um alcaloide de Pilocarpus microphyllus na função de micróglias imortalizadas
Auteur(s): Eschimith, Vanessa da Silva
Orientador(es):: Kückelhaus, Selma Aparecida Souza
Coorientador(es):: Borges, Tatiana Karla dos Santos
Assunto:: Anti-inflamatórios
Citocina
Fagocitose
Macrófagos
Date de publication: 25-jui-2024
Référence bibliographique: ESCHIMITH, Vanessa da Silva. Avaliação da epiisopilosina, um alcaloide de Pilocarpus microphyllus na função de micróglias imortalizadas. 2023. 83 f., il. Dissertação (Mestrado em Medicina Tropical) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.
Résumé: Introdução: A prospecção de novas moléculas é importante para contrapor ao grande número de agentes infecciosos, doenças e condições pelos mecanismos de resistência e tolerância aos medicamentos. Os alcaloides constituem um grupo amplo de moléculas cuja atividade biológica vem sendo cada vez mais explorada pela sua capacidade de interação com receptores e proteínas celulares. A epiisopilosina (EPIIS) obtida da espécie Pilocarpus microphyllus apresenta baixa citotoxicidade e efeito anti-inflamatório. Considerando a função dos macrófagos no sistema imunitário, esse estudo avaliou o efeito de diferentes concentrações da EPIIS na função inata de macrófagos/micróglias imortalizados. Material e Método: Trata-se de um estudo experimental, descritivo e in vitro realizado com células da linhagem C20 (micróglias humanas) e BV2 (Micróglias murinas) para avaliar o efeito de diferentes concentrações da EPIIS na viabilidade celular (método do MTT e quimioluminescência), na aderência celular em lamínulas, e por citometria de fluxo, na produção de espécies reativas de oxigênio (EROS) e nitrogênio (ERNS), na produção de corpúsculos lipídicos (CL) e de citocinas; por método morfológico, avaliou-se o índice fagocitário (IF) e a produção do radical superóxido (O2 º ). Resultados: 1) as diferentes concentrações (0,5 a 128 µg/mL) não afetaram o metabolismo mitocondrial das células C20 quando incubadas por 24 h (teste do MTT); 2) a quimioluminescência mostrou que 1 ou 4 a 32 µg/mL aumentou a atividade mitocondrial/viabilidade das células C-20, mas reduziu com 128 µg/mL; 3) a incubação das células BV-2 com 0,5 µg/mL/2h ou com 32, 64 ou 128 µg/mL por 24 h aumentaram o % de células viáveis (teste do MTT), mas as demais concentrações não afetaram o metabolismo mitocondrial das células (2 ou 24 h); 4) houve redução no % de células C-20 aderidas pela incubação por 24 h com 4,0 ou 64,0 µg/mL; 5) a maior concentração (64,0 µg/mL) aumentou a produção estimulada ou basal de EROS e a produção basal de ERNS pelas células C-20; 6) a produção estimulada de ERNS (LPS ou LPS + TNF) foi inibida pelas células C-20 com 64,0 µg/mL; 7) a produção basal de CL foi maior nas células C-20 com 0,5 µg/mL, mas a estimulada (LPS) foi inibida com 64,0 µg/mL; 8) a menor concentração (0,5 µg/mL) aumentou a produção basal de IL-17A das células C-20, mas foi inibida na presença do LPS com 0,5, 4,0 ou 64,0 µg/mL; 9) as três concentrações de EPIIS não afetaram a produção basal das citocinas IL-2, IL-6, FNT, INF, IL-4 ou IL-10 nas células C-20; 10) 4 µg/mL/2h aumentou o IF das células BV-2 pelo maior % de células fagocitantes (%cel), enquanto que 0,5 ou 4,0 µg/mL por 24 h reduziu o IF pela menor %cels e pelo menor nº de leveduras ingeridas (Mlev). Quanto ao tempo de incubação (2 ou 24 horas) com as células BV-2 os resultados mostraram que: 11) houve redução na produção do radical O2 º nas três concentrações com 2 h, mas não com 24 h; 12) comparado com 2 h, houve aumento na Mlev com 64 µg/mL/24 h; 13) o IF foi maior com 24 h no controle, do que com 2 h, pelo maior %céls e pela Mlev; 14) A produção do radical O2º foi maior com 64 µg/mL/24 h, comparado com 2 h. Conclusão: O conjunto dos ensaios funcionais demonstraram que as três concentrações de EPIIS afetaram a atividade mitocondrial das micróglias, a expressão de receptores de aderência, a produção de EROS e ERNS, a produção de corpúsculos lipídicos/citocinas e a capacidade fagocitária, evidenciando o potencial das da EPIIS em modular a resposta imunitária inata das micróglias, assim, sugere-se a continuidade dos estudos visando a futuras aplicações biomédicas in vivo.
Abstract: Introduction: The search for new molecules is important to counteract the large number of infectious agents, diseases and conditions through the mechanisms of drug resistance and tolerance. Alkaloids are a broad group of molecules whose biological activity has been increasingly explored due to their ability to interact with cell receptors and proteins. Epiisopilosin (EPIIS) obtained from the species Pilocarpus microphyllus has low cytotoxicity and anti-inflammatory effects. Considering the function of macrophages in the immune system, this study evaluated the effect of different concentrations of EPIIS on the innate function of immortalized macrophages/microglia. Material and Methods: This is an experimental, descriptive and in vitro study carried out with C20 (human microglia) and BV2 (murine microglia) cells to evaluate the effect of different concentrations of EPIIS on cell viability (MTT method and chemiluminescence), cell adherence on coverslips, and by flow cytometry, the production of reactive oxygen (EROS) and nitrogen (ERNS) species, the production of lipid corpuscles (LC) and cytokines; by morphological method, the phagocytic index (PI) and the production of the superoxide radical were assessed (O2 º ). Results: 1) the different concentrations (0.5 to 128 µg/mL) did not affect the mitochondrial metabolism of C-20 cells when incubated for 24 h (MTT test); 2) chemiluminescence showed that 1 or 4 at 32 µg/mL increased the mitochondrial activity/viability of C-20 cells, but reduced it with 128 µg/mL; 3) incubation of BV-2 cells with 0.5 µg/mL/2h or with 32, 64 or 128 µg/mL for 24 h increased the % of viable cells (MTT test), but the other concentrations did not affect the mitochondrial metabolism of the cells (2 or 24 h); 4) there was a reduction in the % of adhered C-20 cells by incubation for 24 h with 4.0 or 64.0 µg/mL; 5) the highest concentration (64.0 µg/mL) increased the stimulated or basal production of EROS and the basal production of ERNS by C-20 cells; 6) the stimulated production of ERNS (LPS or LPS + TNF) was inhibited by C-20 cells with 64.0 µg/mL; 7) the basal production of CL was higher in C-20 cells with 0.5 µg/mL, but the stimulated one (LPS) was inhibited with 64.0 µg/mL; 8) the lowest concentration (0.5 µg/mL) increased the basal production of IL-17A in C-20 cells, but was inhibited in the presence of LPS at 0.5, 4.0 or 64.0 µg/mL; 9) the three concentrations of EPIIS did not affect the basal production of the cytokines IL-2, IL-6, NTF, INF, IL-4 or IL-10 in C-20 cells; 10) 4 µg/mL/2h increased the IF of BV-2 cells by the highest % of phagocytizing cells (%cels), while 0.5 or 4.0 µg/mL for 24 h reduced the IF by the lowest %cels and the lowest number of yeasts ingested (Mlev). As for the incubation time (2 or 24 hours) with BV-2 cells, the results showed that: 11) there was a reduction in the production of the O2º radical at the three concentrations at 2 h, but not at 24 h; 12) compared to 2 h, there was an increase in Mlev at 64 µg/mL/24 h; 13) the IF was higher at 24 h in the control, than at 2 h, due to the higher %cels and Mlev; 14) the production of the O2º radical was higher at 64 µg/mL/24 h, compared to 2 h. Conclusion: All the functional tests showed that the three concentrations of EPIIS affected the mitochondrial activity of microglia, the expression of adhesion receptors, the production of EROS and ERNS, the production of lipid corpuscles/cytokines and phagocytic capacity, demonstrating the potential of EPIIS to modulate the innate immune response of microglia, thus suggesting the continuation of studies aimed at future biomedical applications in vivo.
metadata.dc.description.unidade: Faculdade de Medicina (FMD)
Description: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2023.
metadata.dc.description.ppg: Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical
Licença:: A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.
Agência financiadora: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).
Collection(s) :Teses, dissertações e produtos pós-doutorado

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