Avaliação da epiisopilosina, um alcaloide de Pilocarpus microphyllus na função de micróglias imortalizadas

Abstract

Introdução: A prospecção de novas moléculas é importante para contrapor ao grande número de agentes infecciosos, doenças e condições pelos mecanismos de resistência e tolerância aos medicamentos. Os alcaloides constituem um grupo amplo de moléculas cuja atividade biológica vem sendo cada vez mais explorada pela sua capacidade de interação com receptores e proteínas celulares. A epiisopilosina (EPIIS) obtida da espécie Pilocarpus microphyllus apresenta baixa citotoxicidade e efeito anti-inflamatório. Considerando a função dos macrófagos no sistema imunitário, esse estudo avaliou o efeito de diferentes concentrações da EPIIS na função inata de macrófagos/micróglias imortalizados. Material e Método: Trata-se de um estudo experimental, descritivo e in vitro realizado com células da linhagem C20 (micróglias humanas) e BV2 (Micróglias murinas) para avaliar o efeito de diferentes concentrações da EPIIS na viabilidade celular (método do MTT e quimioluminescência), na aderência celular em lamínulas, e por citometria de fluxo, na produção de espécies reativas de oxigênio (EROS) e nitrogênio (ERNS), na produção de corpúsculos lipídicos (CL) e de citocinas; por método morfológico, avaliou-se o índice fagocitário (IF) e a produção do radical superóxido (O2 º ). Resultados: 1) as diferentes concentrações (0,5 a 128 µg/mL) não afetaram o metabolismo mitocondrial das células C20 quando incubadas por 24 h (teste do MTT); 2) a quimioluminescência mostrou que 1 ou 4 a 32 µg/mL aumentou a atividade mitocondrial/viabilidade das células C-20, mas reduziu com 128 µg/mL; 3) a incubação das células BV-2 com 0,5 µg/mL/2h ou com 32, 64 ou 128 µg/mL por 24 h aumentaram o % de células viáveis (teste do MTT), mas as demais concentrações não afetaram o metabolismo mitocondrial das células (2 ou 24 h); 4) houve redução no % de células C-20 aderidas pela incubação por 24 h com 4,0 ou 64,0 µg/mL; 5) a maior concentração (64,0 µg/mL) aumentou a produção estimulada ou basal de EROS e a produção basal de ERNS pelas células C-20; 6) a produção estimulada de ERNS (LPS ou LPS + TNF) foi inibida pelas células C-20 com 64,0 µg/mL; 7) a produção basal de CL foi maior nas células C-20 com 0,5 µg/mL, mas a estimulada (LPS) foi inibida com 64,0 µg/mL; 8) a menor concentração (0,5 µg/mL) aumentou a produção basal de IL-17A das células C-20, mas foi inibida na presença do LPS com 0,5, 4,0 ou 64,0 µg/mL; 9) as três concentrações de EPIIS não afetaram a produção basal das citocinas IL-2, IL-6, FNT, INF, IL-4 ou IL-10 nas células C-20; 10) 4 µg/mL/2h aumentou o IF das células BV-2 pelo maior % de células fagocitantes (%cel), enquanto que 0,5 ou 4,0 µg/mL por 24 h reduziu o IF pela menor %cels e pelo menor nº de leveduras ingeridas (Mlev). Quanto ao tempo de incubação (2 ou 24 horas) com as células BV-2 os resultados mostraram que: 11) houve redução na produção do radical O2 º nas três concentrações com 2 h, mas não com 24 h; 12) comparado com 2 h, houve aumento na Mlev com 64 µg/mL/24 h; 13) o IF foi maior com 24 h no controle, do que com 2 h, pelo maior %céls e pela Mlev; 14) A produção do radical O2º foi maior com 64 µg/mL/24 h, comparado com 2 h. Conclusão: O conjunto dos ensaios funcionais demonstraram que as três concentrações de EPIIS afetaram a atividade mitocondrial das micróglias, a expressão de receptores de aderência, a produção de EROS e ERNS, a produção de corpúsculos lipídicos/citocinas e a capacidade fagocitária, evidenciando o potencial das da EPIIS em modular a resposta imunitária inata das micróglias, assim, sugere-se a continuidade dos estudos visando a futuras aplicações biomédicas in vivo.