Integração de estratégias computacionais e experimentais para a investigação da proteína ligante de odor (OBP) salivar de Rhodnius Neglectus, vetor da Doença de Chagas

Abstract

O Rhodnius neglectus, um inseto da família Reduviidae (Hemiptera), é um potencial vetor do Trypanosoma cruzi, o protozoário responsável pela doença de Chagas. Na saliva do R. neglectus, encontram-se moléculas importantes que neutralizam os mecanismos de coagulação do hospedeiro, auxiliando na alimentação sanguínea e, indiretamente, na transmissão do protozoário. Por isso, a saliva desse inseto hematófago tem sido alvo relevante de estudos devido à presença de moléculas com alto potencial biotecnológico. Este trabalho teve como objetivo estudar uma Proteína de Ligação a Odorantes da saliva do R. neglectus (RnOBP) visando contribuir na compreensão de suas características estruturais e funcionais, utilizando abordagens computacionais e experimentais. Foram realizadas modelagens moleculares da RnOBP e ensaios computacionais de dinâmica molecular e clusterização para obter informações sobre a flexibilidade da proteína. Em seguida, foram realizados ensaios de docking molecular para verificar a afinidade da RnOBP com alguns ligantes relacionados à coagulação de vertebrados. Por fim, observou-se uma possível forma de oligomerização da RnOBP. Para a obtenção da RnOBP recombinante, a sequência nucleotídica da proteína foi obtida a partir do transcriptoma do R. neglectus, clonada no vetor de expressão pET100/D-TOPO e produzida por bactérias Escherichia coli Rosetta(DE3)pLysS. A RnOBP recombinante foi purificada por cromatografia de afinidade, renovelada e utilizada em ensaios de caracterização biofísica. O modelo gerado pelo Alphafold mostrou que a RnOBP é formada por hélices α e possui uma cavidade interna significativa, potencialmente um sítio de ligação. Em comparação com outras OBPs de insetos, independentemente da composição ou classificação da OBP, a região do sítio de ligação é bem conservada. A RnOBP recombinante purificada a partir de corpos de inclusão revelou uma composição de estrutura secundária diferente da esperada. Os ensaios funcionais iniciais mostraram que a rRnOBP pode atuar na inibição da agregação plaquetária, mas não a coagulação. Este estudo mostrou propriedades estruturais da RnOBP e pode contribuir para a compreensão de suas funções e potencial biotecnológico.