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Título : Produção da proteína ECA2 recombinante para utilização no desenvolvimento de anticorpos monoclonais com fins terapêuticos e diagnósticos da Covid-19
Autor : Morais, Cristiana Soares dos Santos de
Orientador(es):: Nicola, André Moraes
Assunto:: Covid-19
Anticorpos monoclonais
Enzima conversora da angiotensina
Proteína recombinante
Fecha de publicación : 13-sep-2023
Citación : MORAIS, Cristiana Soares dos Santos de. Produção da proteína ECA2 recombinante para utilização no desenvolvimento de anticorpos monoclonais com fins terapêuticos e diagnósticos da Covid-19. 2022. 63 f., il. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, 2022.
Resumen : O coronavírus SARS-CoV-2, agente etiológico responsável pela pandemia de COVID-19, reconhece a Enzima Conversora da Angiotensina 2 (ECA2) expressa na membrana celular como receptor para ligação à célula humana, iniciando assim a infecção viral. Até o momento não existe tratamento específico para a doença e os métodos diagnósticos disponíveis possuem custos, sensibilidades e especificidades variados. Assim, a produção de anticorpos monoclonais específicos contra o SARS-COV-2 ainda apresenta grande relevância, sendo imprescindível verificar sua capacidade neutralizante a cada nova variante emergente. Neste estudo, foi produzida ECA2 recombinante solúvel por expressão transiente em células de mamíferos HEK 293F e ExpiCHO para utilização no desenvolvimento de anticorpos monoclonais humanos com finalidade terapêutica e diagnóstica da COVID-19. A proteína expressa apresentou boa produtividade nas duas linhagens celulares (1,8 mg/mL e 3,4 mg/mL, respectivamente), porém com diferentes padrões de glicosilação. A ligação da proteína recombinante à proteína Spike do vírus original e das variantes Alfa e Gama foi confirmada em ensaios de ELISA e citometria de fluxo. E a utilização da proteína recombinante em ensaios de inibição da ligação à proteína viral de duas variantes, Alfa e Gama, por scFv foi validada por citometria de fluxo, com inibição superior a 90% por três diferentes anticorpos.
Abstract: SARS-CoV-2 is the etiologic agent of COVID-19 pandemic, which binds to cell surface receptor Angiotensin-converting Enzyme 2 (ACE2) to begin viral replication. Until the moment, there is no specific treatment for the disease and available diagnostic methods vary in costs, sensibility, and specificity. In this context, specific anti-SARS-CoV-2 monoclonal antibodies development is still of great relevance and to test their neutralization capacity for each new variant will continue to be essential. In this study, we have transiently expressed soluble recombinant ACE2 in different mammalian cell lines HEK293F and ExpiCHO to apply in development of human monoclonal antibodies to therapeutic and diagnostic uses in COVID-19. The productivity of recombinant protein was high for both cell lines (1,8 mg/mL and 3,4 mg/mL, respectively), but they showed different glycosylation patterns. The binding capacity of the expressed protein to Spike protein of original virus and variants was confirmed in ELISA and flow cytometry. And the applicability of recombinant protein in inhibition assays with Alpha and Gama variants was validated by flow cytometry, with inhibitory capacity superior of 90% for three scFv clones.
metadata.dc.description.unidade: Faculdade de Medicina (FMD)
Descripción : Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2022.
metadata.dc.description.ppg: Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular
Aparece en las colecciones: Teses, dissertações e produtos pós-doutorado
UnB - Covid-19

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