Produção da proteína ECA2 recombinante para utilização no desenvolvimento de anticorpos monoclonais com fins terapêuticos e diagnósticos da Covid-19

Abstract

O coronavírus SARS-CoV-2, agente etiológico responsável pela pandemia de COVID-19, reconhece a Enzima Conversora da Angiotensina 2 (ECA2) expressa na membrana celular como receptor para ligação à célula humana, iniciando assim a infecção viral. Até o momento não existe tratamento específico para a doença e os métodos diagnósticos disponíveis possuem custos, sensibilidades e especificidades variados. Assim, a produção de anticorpos monoclonais específicos contra o SARS-COV-2 ainda apresenta grande relevância, sendo imprescindível verificar sua capacidade neutralizante a cada nova variante emergente. Neste estudo, foi produzida ECA2 recombinante solúvel por expressão transiente em células de mamíferos HEK 293F e ExpiCHO para utilização no desenvolvimento de anticorpos monoclonais humanos com finalidade terapêutica e diagnóstica da COVID-19. A proteína expressa apresentou boa produtividade nas duas linhagens celulares (1,8 mg/mL e 3,4 mg/mL, respectivamente), porém com diferentes padrões de glicosilação. A ligação da proteína recombinante à proteína Spike do vírus original e das variantes Alfa e Gama foi confirmada em ensaios de ELISA e citometria de fluxo. E a utilização da proteína recombinante em ensaios de inibição da ligação à proteína viral de duas variantes, Alfa e Gama, por scFv foi validada por citometria de fluxo, com inibição superior a 90% por três diferentes anticorpos.