Efeito do parasitismo por Trypanosoma cruzi sobre o potencial imunomodulatório parácrino de células-tronco

Abstract

A doença de Chagas é uma infecção parasitária cujo agente etiológico é o protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi. A doença impacta tecidos como a medula óssea e tecido adiposo, onde são encontradas as células-tronco mesenquimais (CTMs). Porém, até o momento, ainda não se caracterizou as consequências da infecção de CTMs pelo parasito. Portanto, neste trabalho investigamos o potencial de imunomodulação parácrina de populações de CTMs obtidas do tecido adiposo de doadores humanos saudáveis após a infecção in vitro por T. cruzi. As CTMs foram isoladas do tecido adiposo de doadores saudáveis e caracterizadas, atendendo aos critérios de classificação da Sociedade Internacional de Terapia Celular. Foi estabelecida a assinatura imunológica de cada doador de CTM através da avaliação da expressão de mediadores anti-inflamatórios. Percebeu-se que existe diferença nos níveis de expressão basal dos genes relacionados à imunomodulação entre as CTMs de diferentes doadores. As CTMs foram infectadas pela cepa Colombiana de T. cruzi, na proporção 1:1 e 1:5 (CTMs: parasitos). A carga parasitária foi verificada através da detecção e quantificação relativa do gene Tc40 e revelou variação entre as amostras. O meio condicionado entre o 5o e 7o dia de infecção das CTMs foi obtido e utilizado para realização de ensaios de dosagem de óxido nítrico (NO) em macrófagos estimulados ou não por LPS e proliferação de células T em amostras de células polimorfonucleares do sangue periférico estimuladas ou não por fitohemaglutinina (PHA). Observou-se que independente do status de infecção, o sobrenadante das CTM diminuiu o nível de liberação de NO induzido pelo LPS e a proliferação de linfócitos T induzida pela PHA. Apesar das variações individuais observadas, a infecção por T. cruzi comprometeu a capacidade modulatória do sobrenadante das CTMs sobre os macrófagos, mas não sobre os linfócitos T. Individualmente, a infecção pelo parasito promoveu tanto o aumento quanto a diminuição da atividade imunomodulatória parácrina das CTMs isoladas de diferentes doadores. Os sobrenadantes de CTM impactaram na expressão de IL-1B e IL-10 em macrófagos, possivelmente levando a alterações de polarização M1 e M2. Nos ensaios de ativação de linfócitos T em amostras de células mononucleares de sangue periférico, observou-se novamente que a infecção por T. cruzi tem diferentes impactos sobre as CTM, de acordo com cada doador. Porém, quando analisados individualmente de maneira qualitativa, os dados permitem notar que o potencial imunomodulatório parácrino das CTM 1 e 3 foi realçado após infecção pelo parasita, enquanto o potencial imunossupressor parácrino da CTM 2 foi comprometido após infecção pelo parasito. Tomados juntos, os resultados demonstram que as CTMs podem ser parasitadas por T. cruzi, e que a infecção tem diferentes impactos sobre o potencial imunomodulatório das células derivadas de diferentes doadores. O impacto da infecção de CTMs pelo parasito deve ser, portanto, investigado em trabalhos futuros com o intuito de estabelecer o impacto da infecção de CTMs para o prognóstico da doença.