Expressão Heteróloga de asparaginase de Fusarium e Penicillium. Vetor de Expressão constitutiva de baixa expressão pSFOXB1.

Abstract

A enzima L-asparaginase é utilizada no tratamento da Leucemia Linfoblástica aguda (LLA) no Brasil e no Mundo. No Brasil, já se tem um protocolo de tratamento desenvolvido pelo Instituto Nacional de Câncer (INCA) de 2001, utilizando L - asparaginases de origem bacteriana, principalmente de Escherichia coli e Erwinia chrysanthemi. No Brasil não há registro de produção de L-Asparaginase no país e o SUS (Sistema Único de Saúde), apresenta dificuldade no seu abastecimento uma vez que esta enzima é importada. Neste cenário, a presente proposta de pesquisa teve como meta central desenvolver linhagens bacterianas produtoras de L-asparaginases de origem fúngica, Fusarium proliferatum e Penicillium sizovae e avaliar a sua utilização no desenvolvimento de formulação estável para tratamento de LLA e, assim, contribuir para o desenvolvimento de processo nacional de produção de L-asparaginases em larga escala. As sequências dos genes de asparaginases de P. sizovae e F. proliferatum foram sintetizadas e clonadas no vetor pET28A. No presente trabalho, a meta central foi expressar estes genes em Escherichia coli utilizando vetores de expressão constitutiva da série pSFOXB (pSFOXB1, 11 e 15). O gene da Lasparaginase de F. proliferatum foi subclonado no vetor pSFOXB1, sendo obtidos clones recombinantes confirmados por PCR de colônia. Apesar de certificarmos a presença do gene, a proteína heteróloga não foi detectada na fração solúvel ou insolúvel do lisado dos clones positivos.