Assessment of primers designed from the small ribosomal subunit RNA for specific discrimination between Babesia bigemina and Babesia bovis by PCR

Abstract

ABSTRACT

Seis pares de primers espécie-específicos foram construídos a partir do alinhamento do gene SS rRNA de Babesia bigemina (número de acesso no Genbank: X59604) e Babesia bovis (número de acesso U06105). Três pares de primers foramconstruídos especificamente para B. bigemina e outros três para B. bovis. As seqüências de oligonucleotídeos, selecionadas como primers, apresentaramelevada especificidade na avaliação quanto à similaridades a outros microrganismos, através do procedimento designado “basic local alignment search tool (BLAST)” do Genbank. Os oligonucleotídeos sintéticos foram também avaliados quanto à especificidade através da reação de PCR, utilizando-se DNA genômico extraído de 40 isolados de B. bigemina e 30 de B. bovis procedentes de seis estados do Brasil. Os resultados da amplificação foram100% específicos para todos os pares de primers testados, obtendo-se, como produtos de PCR, fragmentos de tamanhos esperados para cada combinação de primers e DNA utilizados, como segue: a) B. bigemina: primers GAU5/GAU6 = amplicon de 1124 pares de base (pb); primers GAU5/GAU8 = amplicon de 458 pb; primersGAU7/GAU6 = amplicon de 685 pb; b) B. bovis: primersGAU9/GAU10 = amplicon de 541 pb; primers GAU9/GAU13 =amplicon de 883; primersSOGIN/GAU10 = amplicon de 1211 pb.