Síntese e avaliação da atividade biológica de adutos de Morita-Baylis-Hillman e hexahidrocromenonas frente a cepa de CV026

Abstract

A busca por novas moléculas com atividade antibiótica é de fundamental importância dado o surgimento de novas cepas multirresistentes. Entretanto, novas estratégias, que envolvem a redução da patogenicidade numa infecção bacteriana vem se mostrando como ferramentas poderosas no tratamento de pessoas afligidas por tais enfermidades. Quorum sensing (QS) é um mecanismo de densidade populacional que regula, dentre outros fatores, a expressão de genes de virulência em bactérias. Tal estratégia, permite que a bactéria se comporte como um organismo multicelular e só expresse os fatores de virulência, quando a população alcance determinado limiar, facilitando o ataque ao sistema imunológico do hospedeiro. O QS é baseado na produção de sinais químicos, denominados autoindutores. Em bactérias Gram-negativas, os autoindutores responsáveis pela verificação da densidade populacional são as Nacilhomosserinalactonas. Uma cepa sensor bastante utilizada em ensaios de QS é a Chromobacterium subtsugae CV026 ATCC 31532 que é deletada para dois genes: 1 – o gene cviI, responsável pela síntese do autoindutor; e 2 – o gene vioS, repressor do sistema CviI/R. Essa cepa sensor, na presença de autoindutor fornecido por uma fonte externa, forma um pigmento roxo, conhecido como violaceína, sendo indicador da ocorrência do mecanismo de QS. Dessa forma, a busca de compostos que sejam capazes de reduzir a produção de violaceína, representa o primeiro passo na busca de moléculas que promovam a interferência no processo de patogenicidade bacteriano, sem comprometer o crescimento da cepa e diminuindo as chances de mutação para tipos mais resistentes. Diferentes classes de compostos são capazes de interferir no QS de CV026. Neste trabalho, foram avaliados diferentes subacervos de adutos de Morita-Baylis-Hillman (AMBH) e sua capacidade em interferir na biossíntese da violaceína. A escolha desses compostos é baseada em semelhanças estruturais com a do autoindutor N-acil homosserina lactona cognato. Foi observada a inibição acima de 80% na concentração de 1,25 mM para um dos candidatos avaliados. A indução de violaceína também pôde ser verificada na ausência do autoindutor cognato em um dos ensaios. Além disso, verificou-se a importância da hidroxila dos AMBH para o efeito inibitório. Os dados de ancoragem molecular, competição, atividade quitinolítica e RT-qPCR, sugerem que a interfeferência ocorre em nível transcricional. O trabalho também aborda a síntese de uma classe de compostos que foram previamente avaliados quanto à sua capacidade inibitória de QS em CV026, as hidrocromenonas. A tentativa de promover a separação dos isômeros (R,S) de uma hidrocromenona conduziu a formação do núcleo hidrocromenimina e foi sugerida uma possível explicação conformacional baseada em seus espectros e estudos computacionais. Diferentes e inéditos análogos dessas cromeniminas, foram obtidos empregando hidrazinas e hidroxilaminas.