Análise proteômica e funcional dos neutrófilos ativados por IL-8

Abstract

Os neutrófilos são células do sistema imune inato que apresentam grânulos citoplasmáticos e núcleo multilobulado, sendo classificadas como polimorfonucleares (PMN). Os PMNs podem ser ativados por bactérias, fungos ou por mediadores pró-inflamatórios como, por exemplo, espécies reativas de oxigênio (ERO), e interleucinas, dentre elas a interleucina-8 (IL-8). A IL-8 é uma quimiocina da família CXCL e apresenta grande afinidade por neutrófilos por meio dos receptores CXCR1 e CXCR2, desencadeando atividades como quimiotaxia, modulações do cálcio intracelular, desgranulação, dentre outras. Neutrófilos são os primeiros a chegar ao local da infecção, auxiliando no combate a patógenos e reparo dos tecidos lesionados. Como alguns estudos evidenciam falhas de regulação nessas células, a informação sobre os mecanismos de ativação, como a produção de espécies reativas de oxigênio, ganha relevância. Essas falhas estão associadas a patologias severas como, por exemplo, síndrome da angústia respiratória aguda, artrite reumatoide e síndrome da resposta inflamatória sistêmica. Ao analisar os mecanismos moleculares dos neutrófilos ativados pela IL-8 por meio de análise proteômica comparativa e associando tais dados às funções efetoras dos neutrófilos por meio de testes funcionais, observamos alterações relevantes com potenciais aplicações no futuro. Na análise proteômica do presente trabalho foram identificadas 653 proteínas, sendo 39 proteínas significativamente reguladas, das quais 16 apresentaram abundância diminuída e 23 com abundância aumentada. Tais proteínas evidenciaram diferentes processos biológicos enriquecidos, como desgranulação, estresse celular, exocitose e transporte mediado por vesículas. Além disso, foi abordada neste trabalho a controvérsia na literatura quanto à ativação das vias de NADPH oxidase dos neutrófilos por IL-8, pois alguns estudos defendem a ideia de que os neutrófilos expostos à IL-8 não ativam as vias de NADPH oxidase, enquanto outros afirmam que tal ativação ocorre. Para isso foram utilizadas duas concentrações de IL-8 (100 ng/mL e 50 ng/mL) e testes por microscopia, espectrofotometria (NBT) e ressonância eletrônica paramagnética (EPR). Os ensaios de EPR demonstraram diferença significativa na produção de EROs entre o controle e ambas concentrações de IL-8, bem como entre as duas concentrações de IL-8, já o teste de NBT evidenciou apenas diferença significativa entre controle e IL-8 (100 ng/ml). Dessa forma, além de esclarecer a controvérsia na literatura, o conjunto dos testes moleculares e funcionais permitiu propor hipóteses associando as proteínas ORM1, SERPINA1, HP e HRG aos processos de modulação de espécies reativas de oxigênio. Dessa forma, acreditamos que o presente trabalho foi capaz de criar novos insights mostrando diferentes aspectos na interação dos neutrófilos estimulados por IL-8.