DC Field | Value | Language |
dc.contributor.advisor | Charneau, Sebastien Olivier | pt_BR |
dc.contributor.author | Souza, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de | pt_BR |
dc.date.accessioned | 2024-09-02T21:18:05Z | - |
dc.date.available | 2024-09-02T21:18:05Z | - |
dc.date.issued | 2024-09-02 | - |
dc.date.submitted | 2024-02-23 | - |
dc.identifier.citation | SOUZA, Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de. Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV. 2024. 115 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, Brasília, 2024. | pt_BR |
dc.identifier.uri | http://repositorio.unb.br/handle/10482/50271 | - |
dc.description | Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2024. | pt_BR |
dc.description.abstract | Mayaro virus (MAYV) e Chikungunya virus (CHIKV) são dois arbovírus pertencentes ao
gênero Alphavirus e que são transmitidos pelo mosquito Aedes aegypti. Enquanto o MAYV é
endêmico da América do Sul, o CHIKV já foi responsável por epidemias em todo o globo. Os
elevados números de casos de arboviroses pelo mundo e o fato de muitas populações de mosquitos
serem resistentes a inseticidas levaram à necessidade de desenvolvimento de estratégias alternativas
de controle desses vírus. Houve um aumento expressivo na quantidade de estudos focados na
interação vírus-vetor, muitos deles analisando aspectos moleculares, como as proteínas envolvidas
nessa interação. Neste sentido, o presente estudo abordou a análise proteômica de células Aag-2 de
Ae. aegypti infectadas com CHIKV em multiplicidade de infecção (MOI) 0,1 e tempos de coleta t
= 0 h, 12 horas pós-infecção (h p.i.) e 48 h p.i. As amostras, em triplicatas biológicas, foram
identificadas por espectrometria de massas após redução, alquilação e digestão. Entre outros
resultados, foi observada uma maior abundância de proteínas relacionadas à tradução em 12 h p.i.,
enquanto proteínas relacionadas à produção de energia, em 48 h p.i. As imagens de microscopia
eletrônica de transmissão revelaram, além de muitas partículas virais, mitocôndrias com formato
alongado em 48 h p.i. Tal morfologia pode ser consequência de um provável desbalanço da rede
mitocondrial decorrente da infecção viral, gerando uma maior demanda energética. Ademais, sabese que a fosforilação de proteínas está altamente relacionada à regulação espaçotemporal de
diversos processos essenciais ao funcionamento dos organismos. Como os vírus sequestram a
maquinaria celular do hospedeiro para sua própria replicação, espera-se encontrar uma modulação
diferencial no padrão de fosforilação nas células infectadas. Assim, objetivou-se realizar uma
análise fosfoproteômica de células Aag-2 infectadas com MAYV e CHIKV no presente trabalho.
Foi realizada uma predição in silico de fosfoproteínas de Ae. aegypti e as 433 proteínas resultantes
foram enriquecidas para processos como autofagia e via de sinalização MAPK. Para as análises
experimentais, foram utilizados o MOI 1 e os tempos de coleta t = 0 h, 2 h p.i., 4 h p.i., 8 h p.i. e 12
h p.i., em quadruplicatas biológicas. As proteínas extraídas a partir das células Aag-2 foram
utilizadas para Western Blot e espectrometria de massas. Os ensaios de Western Blot contra
anticorpos anti-fosfoserina, fosfotirosina e fosfotreonina apresentaram diferentes padrões de
marcação na comparação por anticorpo. A partir do processamento do extrato total de proteínas
para a espectrometria de massas e dessalinização, foi realizado o enriquecimento de fosfopeptídeos
por colunas de dióxido de titânio (TiO2). Após a obtenção dos dados da análise por espectrometria
de massas, a análise de bioinformática nos permitirá verificar a influência da infecção por MAYV
e CHIKV sobre a homeostase das células hospedeiras de Ae. aegypti nas vias metabólicas que são
reguladas por eventos de fosforilação. | pt_BR |
dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF). | pt_BR |
dc.language.iso | por | pt_BR |
dc.rights | Acesso Aberto | pt_BR |
dc.title | Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV | pt_BR |
dc.type | Tese | pt_BR |
dc.subject.keyword | Arbovírus | pt_BR |
dc.subject.keyword | Aedes aegypti | pt_BR |
dc.subject.keyword | Células - cultura e meios de cultura | pt_BR |
dc.subject.keyword | Espectrometria de massa | pt_BR |
dc.subject.keyword | Proteínas | pt_BR |
dc.subject.keyword | Fosforilação | pt_BR |
dc.rights.license | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data. | pt_BR |
dc.description.abstract1 | Mayaro virus (MAYV) and Chikungunya virus (CHIKV) are two arboviruses belonging to the
genus Alphavirus and transmitted by the Aedes aegypti mosquito. While MAYV is endemic to
South America, CHIKV has been responsible for epidemics across the globe. The high number of
arbovirus cases around the world and the fact that many mosquito populations are resistant to
insecticides have led to the need to develop alternative strategies to control these viruses. There has
been a significant increase in the number of studies focused on the virus-vector interaction, many
of them analyzing molecular aspects, such as the proteins involved in this interaction. In this sense,
the present study addressed the proteomic analysis of Aag-2 cells from Ae. aegypti infected with
CHIKV at multiplicity of infection (MOI) 0.1 and collection times t = 0 h, 12 hours post-infection
(h p.i.) and 48 h p.i. The samples, in biological triplicates, were identified by mass spectrometry
after reduction, alkylation, and digestion. Among other results, a greater abundance of proteins
related to translation was observed at 12 h p.i., while proteins related to energy production were
observed at 48 h p.i. Transmission electron microscopy images revealed, in addition to many viral
particles, mitochondria with an elongated shape at 48 h p.i. This morphology may be a consequence
of a probable imbalance in the mitochondrial network resulting from the viral infection, generating
a greater energy demand. Furthermore, it is known that protein phosphorylation is highly related to
the spatiotemporal regulation of several processes essential to the functioning of organisms. As
viruses hijack the host's cellular machinery for their own replication, we expect to find a differential
modulation in the phosphorylation pattern in infected cells. Thus, the aim was to perform a
phosphoproteomic analysis of Aag-2 cells infected with MAYV and CHIKV in the present work.
An in silico prediction of Ae. aegypti phosphoproteins was performed and the resulting 433 proteins
were enriched for processes such as autophagy and the MAPK signaling pathway. For experimental
analyses, MOI 1 and collection times t = 0 h, 2 h p.i., 4 h p.i., 8 h p.i. were used. and 12 h p.i., in
biological quadruplicates. Proteins extracted from Aag-2 cells were used for Western blot and mass
spectrometry. Western blot assays against anti-phosphoserine, phosphotyrosine, and
phosphothreonine antibodies showed different staining patterns when compared by antibody. From
the processing of the total protein extract for mass spectrometry and desalination, the enrichment
of phosphopeptides was carried out using titanium dioxide (TiO2) columns. After obtaining data
from mass spectrometry analysis, bioinformatics analysis will allow us to verify the influence of
MAYV and CHIKV infection on the homeostasis of Ae. aegypti host cells in metabolic pathways
that are regulated by phosphorylation events. | pt_BR |
dc.description.unidade | Faculdade de Medicina (FM) | pt_BR |
dc.description.ppg | Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular | pt_BR |
Appears in Collections: | Teses, dissertações e produtos pós-doutorado
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