Terapia multimodal para tratamento de câncer colorretal resistente à quimioterapia

Abstract

Introdução: A aquisição de resistência a quimioterapia é um grande desafio na terapia anticâncer. Apesar de ser utilizada como o tratamento de primeira linha para tumores colorretais (CRC) avançados ou metastáticos, o desenvolvimento de resistência à oxaliplatina (L-OHP) é um problema que acomete 40% dos pacientes tratados e está relacionado à baixa taxa de sobrevivência desses pacientes. Objetivo: Analisar o efeito combinado de curcumina livre (CURC) ou nanopartículas lipídicas sólidas com curcumina (NLSC), terapia fotodinâmica (TFD) mediada por alumínio-cloro ftalocianina (NE-AlClFt) em nanoemulsão, para melhorar a resposta da L-OHP no tratamento de uma linhagem de CRC L-OHP-resistente, visando reverter o perfil de resistência e sensibilizar as células à quimioterapia com L-OHP. Métodos: O ensaio de citotoxicidade (MTT) foi utilizado para determinar a concentração de L-OHP necessária para matar 50% (IC50) das células da linhagem de carcinoma colorretal humano (HCT116-S). A linhagem HCT116 resistente à L-OHP (HCT116-R) foi estabelecida por meio da exposição a concentrações crescentes de L-OHP até o valor de 10x o IC50. Ao final, as linhagens HCT116-S e HCT116-R foram caracterizadas quanto ao tempo de duplicação, taxa de crescimento, capacidade de formar esferas tumorais e análise do ciclo/morte por citometria de fluxo. Foi determinado o IC50 para os tratamentos CURC, NLSC e TFD, seguido da análise de sinergismo de cada combinação terapêutica. As combinações terapêuticas foram avaliadas quanto ao efeito na viabilidade celular, capacidade clonogênica, capacidade migratória, perfil de morte celular e expressão gênica. Resultados: A linhagem HCT116-R foi estabelecida em 11 meses, apresentando IC50 para L-OHP significativamente diferente da linhagem original (2,7±0,3 µM e 26,6±1,5 µM para HCT116-S e HCT116-R, respectivamente). Quando comparada com HCT116-S, as células HCT116-R apresentaram mudanças significativas na taxa de crescimento e na capacidade de formar esferas tumorais. O valor de IC50 obtido para cada tratamento foi: HCT116-S= (CURC): 7,2±0,6 µM; (NLSC): 7,1±1,3 µM; e (TFD): 4,4±0,2 µM; para a linhagem HCT116-R= (CURC): 5,1±0,8 µM; (NLSC): 9,4±0,6 µM; e (TFD): 5,3±0,1 µM. O ensaio de efeito sinérgico mostrou uma dose-dependência em ambas as linhagens, sendo escolhida a combinação terapêutica: pré-tratamento com TFD [IC50], seguido da exposição à L-OHP [½ do IC50] e CURC [IC50]. O tratamento combinatório foi eficaz quanto à redução da viabilidade celular, capacidade clonogênica e capacidade migratória. HCT116-R tratadas com L-OHP+CURC e TFD+L-OHP+CURC apresentaram maior tendência de morte por necrose. As células HCT116-R tiveram redução na expressão de genes envolvidos em vias relacionadas a transcrição e regulação da expressão gênica, no entanto, quando tratadas, houve um aumento da expressão dos genes envolvidos nessas vias. Um total de 20 genes candidatos foram selecionados para validação futura por RT-qPCR, os quais se relacionam principalmente com a atividade de p53, resposta a dano celular, e desenvolvimento tumoral. Conclusões: As características observadas para a linhagem HCT116-R são consistentes com o perfil de resistência. O tratamento multimodal TFD+L-OHP+CURC é eficaz para melhorar o efeito da L-OHP, mesmo utilizando uma concentração baixa do quimioterápico, possibilitando manter a eficácia terapêutica, sem necessidade de aumentar a concentração de L-OHP, trazendo perspectiva futura de redução de efeito tóxicos comumente associados a utilização da L-OHP.