Skip navigation
Veuillez utiliser cette adresse pour citer ce document : http://repositorio.unb.br/handle/10482/48306
Fichier(s) constituant ce document :
Fichier Description TailleFormat 
MarianaNogueiraDeMouraFreitas_DISSERT.pdf2,38 MBAdobe PDFVoir/Ouvrir
Titre: Engenharia genética de Komagataella phaffii para aumento da tolerância a inibidores presentes no hidrolisado lignocelulósico
Auteur(s): Freitas, Mariana Nogueira de Moura
Orientador(es):: Almeida, João Ricardo Moreira de
Assunto:: Biomassa lignocelulósica
Inibidores
Microrganismos
Date de publication: 18-jui-2024
Référence bibliographique: FREITAS, Mariana Nogueira de Moura. Engenharia genética de Komagataella phaffii para aumento da tolerância a inibidores presentes no hidrolisado lignocelulósico. 2023.85 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Microbiana) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.
Résumé: A biomassa lignocelulósica representa uma matéria-prima renovável de grande potencial para a produção de energia e compostos químicos industriais, a partir de sua utilização por microrganismos. Entre os desafios do uso da biomassa em bioprocessos, está a presença de compostos inibitórios ao metabolismo microbiano, produzidos durante as etapas de pré-tratamento da fração lignocelulósica. Os inibidores estão agrupados em ácidos orgânicos (ácidos acético, fórmico e levulínico), furaldeídos (2- furaldeído (furfural) e 5-hidroximetil-2-furaldeído (HMF)) e compostos fenólicos. A levedura Komagataella phaffii, cada vez mais empregada na produção de proteínas heterólogas e compostos químicos a partir de biomassa, foi escolhida neste trabalho para superexpressar genes potencialmente envolvidos no aumento da resposta de tolerância aos principais inibidores do hidrolisado lignocelulósico de bagaço de cana de açúcar. Duas linhagens recombinantes, X33-pKLD-YJR096W e X33-pKLD-YNL134C, além da levedura controle, foram construídas e cultivadas na presença de HMF. Em meio suplementado com HMF 2 g. L-1, as linhagens superexpressando os genes YJR096W e YNL134C foram capazes de deixar a fase lag de crescimento 17 horas antes da levedura controle, além de apresentaram um maior consumo de glicose nas primeiras 48 horas de cultivo (33,9 e 44,04 g. L-1 , respectivamente), quando comparado ao controle (24,59 g. L -1), assim como maior conversão de HMF em compostos menos tóxicos, como furano 2,5- dimetanol, nas primeiras 7 horas (1,29 e 1,87 g. L -1, respectivamente), em comparação à levedura controle (1,01 g. L-1). Em concentrações mais elevadas de HMF (3,5 g. L-1), as linhagens X33-pKLD-YJR096W e X33-pKLDYNL134C foram capazes de deixar a fase lag 12 horas antes da levedura controle, além de terem sido capazes de consumir mais glicose (23,68 e 29,34 g. L-1, respectivamente), nas primeiras 48 horas, quando comparadas ao controle (21,55 g. L-1) e terem convertido mais HMF (3,18 e 3,45 g. L-1, respectivamente) em comparação à levedura controle (2,78 g. L-1, respectivamente). Os resultados, portanto, revelaram que a superexpressão dos genes YJR096W e YNL134C conferiu à K. phaffii um fenótipo de tolerância à presença do HMF, presente no hidrolisado lignocelulósico, refletido nas maiores taxas de crescimento celular, consumo de glicose e conversão de HMF em espécies químicas menos toxicas ao metabolismo celular.
Abstract: Lignocellulosic biomass represents a renewable raw material with great potential for the production of energy and industrial chemical compounds, based on its use by microorganisms. Among the challenges of using biomass in bioprocesses is the presence of compounds that inhibit microbial metabolism, produced during the pretreatment stages of the lignocellulosic fraction. The inhibitors are grouped into organic acids (acetic, formic and levulinic acids), furaldehydes (2-furaldehyde (furfural) and 5- hydroxymethyl-2-furaldehyde (HMF)) and phenolic compounds. The yeast Komagataella phaffii, which is increasingly being used to produce heterologous proteins and chemical compounds from biomass, was chosen in this study to overexpress genes potentially involved in increasing the tolerance response to the main inhibitors in sugar cane bagasse lignocellulosic hydrolysate. Two recombinant strains, X33-pKLD-YJR096W and X33-pKLD-YNL134C, as well as the control yeast, were constructed and grown in the presence of HMF. In medium supplemented with HMF 2 g. L-1, the strains overexpressing the YJR096W and YNL134C genes were able to leave the growth lag phase 17 hours earlier than the control yeast, as well as showing higher glucose consumption in the first 48 hours of cultivation (33.9 and 44.04 g. L-1, respectively), when compared to the control (24.59 g. L-1), as well as greater conversion of HMF into less toxic compounds, such as furan 2,5- dimethanol, in the first 7 hours (1.29 and 1.87 g. L-1, respectively), compared to the control yeast (1.01 g. L-1). At higher concentrations of HMF (3.5 g. L-1), strains X33-pKLD-YJR096W and X33-pKLD-YNL134C were able to leave the lag phase 12 hours earlier than the control yeast, and were also able to consume more glucose (23.68 and 29.34 g. L-1, respectively) in the first 48 hours compared to the control (21.55 g. L-1) and were able to convert more HMF (3.18 and 3.45 g. L-1, respectively) compared to the control yeast (2.78 g. L-1, respectively). The results therefore revealed that overexpression of the YJR096W and YNL134C genes gave K. phaffii a phenotype of tolerance to the presence of HMF, present in lignocellulosic hydrolysate, reflected in higher rates of cell growth, glucose consumption and conversion of HMF into chemical species that are less toxic to cell metabolism.
metadata.dc.description.unidade: Instituto de Ciências Biológicas (IB)
Departamento de Biologia Celular (IB CEL)
Description: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2023.
metadata.dc.description.ppg: Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana
Licença:: A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.
Collection(s) :Teses, dissertações e produtos pós-doutorado

Affichage détaillé " class="statisticsLink btn btn-primary" href="/jspui/handle/10482/48306/statistics">



Tous les documents dans DSpace sont protégés par copyright, avec tous droits réservés.