Caracterização eletrofisiológica das toxinas moduladoras de canais de sódio (Tst1 e Tst3) purificadas da peçonha do escorpião Tityus stigmurus

Abstract

imadamente 1,5% das espécies de aracnídeos existentes. Dentro do território brasileiro, são encontradas diversas espécies de escorpiões, estando presente em todos os estados do país. Dentre as espécies de maior importância e abundância estão os animais pertencentes ao gênero Tityus, tendo em vista o grande número de acidentes e problemas graves causados. Uma espécie de destaque é o Tityus stigmurus, espécie endêmica do Nordeste do Brasil. Essa espécie se destaca por ser a maior causadora de picadas nesta região do país, sendo responsável pelo grande número de casos acidentes graves, desencadeando altos índices de internações e morte. A peçonha destes animais é formada por diversos compostos diferentes, no qual os que mais se sobressaem são peptídeos, também conhecidos como neurotoxinas. Essas neurotoxinas são capazes de interagir e afetar o funcionamento de canais iônicos dependentes de voltagem tais como potássio (Kv), cálcio (Cav) e sódio (Nav), responsáveis pela propagação e iniciação de sinais nervosos. Neste trabalho, a peçonha do escorpião Tityus stigmurus foi extraída e submetida ao processo de fracionamento utilizando a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência em Fase Reversa (RP-HPLC). As frações coletadas foram analisadas em Espectrômetro de Massa (MALDI-TOF) e as frações de interesse para este trabalho foram separadas e sequenciadas de forma parcial pelo método de ISD. Após o processo de purificação e identificação, as toxinas purificadas, correspondente às toxinas Tst1 e Tst3, foram testadas em canais de sódio dependentes de voltagem (subtipos Nav 1.1 a 1.7) utilizando a técnica de patchclamp no modo whole cell. A toxina Tst1 demonstrou uma atividade característica da classe das β-toxinas, alterando o potencial de abertura dos canais de sódio (Nav) e inibindo a corrente dos mesmos, tendo uma ação superior no subtipo Nav 1.3. Já a toxina Tst3 manifestou uma atividade característico das α-toxinas, alterando a inativação rápida dos canais de sódio, sendo os subtipos Nav 1.3, 1.6 e 1.7 os mais comprometidos. Assim, as toxinas Tst1 e Tst3 são as primeiras toxinas purificadas da peçonha de Tityus stigmurus amplamente caracterizadas em diferentes isoformas de canais de sódio (Nav).