Estudo comparativo do perfil de N-glicosilação no tecido tumoral, no tecido normal e no soro de pacientes com adenocarcinoma de cólon esporádico. Avaliação por espectrometria de massas

Abstract

A glicosilação é o fenômeno mais comum na pós-tradução de proteínas, frequentemente alterado em diversos processos biológicos, como no câncer colorretal (CCR). Dessa forma, seu estudo e compreensão podem revelar potenciais marcadores tumorais com finalidade de diagnóstico precoce e prognóstico. Objetivo: estudar o perfil de N-glicosilação do soro de pacientes com diagnóstico de câncer de cólon esporádico em relação ao perfil de N-glicosilação do soro de indivíduos sadios. Como objetivo secundário realizou-se a comparação do perfil de N-glicosilação presente no tecido tumoral e no tecido colônico normal, e a correlação entre as composições alteradas no soro e no tecido dos pacientes com câncer de cólon. Método: Soro: Análise qualitativa e quantitativa por espectrometria de massas (EM) pelos métodos MALDI-TOF-MS e LC-MS/MS de N-glicanos extraídos das glicoproteínas totais presentes em 40 μl do soro de pacientes com câncer de cólon e presentes em 40 μl do

soro de indivíduos sadios. Os dois grupos foram normalizados em relação aos N- glicanos presentes em 40 μl do conjunto formado por alíquotas iguais do soro de todos

os indivíduos sadios. Tecido: Análise qualitativa e quantitativa por espectrometria de massas (EM) pelos métodos MALDI-TOF-MS e LC-MS/MS de N-glicanos extraídos das glicoproteínas presentes em 60 mg de tecido tumoral e em 60 mg de tecido colônico

normal de 13 pacientes com câncer de cólon. Resultados: Soro: A análise MALDI-TOF- MS detectou 29 sinais de íon correspondentes a N-glicanos. A composição

HexNac5Hex5NeuAc1 [M+Na]+ foi identificada como relativamente aumentada no soro de pacientes com câncer cólon (α=0,01). A análise LC-MS/MS identificou 53 sinais de íon correspondentes a N-glicanos, dos quais 26 estavam diferentemente expressos no soro de pacientes com câncer (p<0,01), em relação ao soro de individuos sadios. Vinte e três composições estavam diminuídas no soro de pacientes com câncer, das quais 17 eram formas galactosiladas. As composições HexNAc2Hex7 [M+2Na]2+(p=0,0004), HexNAc4Hex5Fuc1NeuAc2 [M+3Na]3+(p=0,0008) e HexNAc6Hex7NeuAc3 [M+4Na]4+(p=0,0014) foram encontradas relativamente aumentadas no soro de pacientes com câncer. A análise do perfil de N-glicosilação identificado no soro, baseada no método de Ward, demonstrou clara diferença na distribuição espacial dos casos, da distribuição espacial dos controles. Tecido: A análise MALDI-TOF-MS detectou 12 sinais de íon correspondentes a N-glicanos. Duas composições oligomanosídicas foram identificadas como aumentadas no tecido tumoral (p<0,01). A análise LC-MS/MS identificou 24 sinais de íon correspondentes a N-glicanos, dos quais 11 estavam diferentemente expressos no tecido tumoral de pacientes com câncer. Dez

composições estavam aumentadas no tecido tumoral, das quais 5 eram formas bi- antenárias incompletas, 4 formas multi-antena e 1 forma rica em manose (p<0,005). A

composição HexNAc2Hex7 [M+2Na]+2 (p<0,01) foi identificada como diminuída no tecido tumoral. Não houve correlação entre as alterações quantitativas das composições

alteradas no soro e as composições alteradas no tecido tumoral, dos pacientes com câncer de cólon. Conclusões: pacientes com câncer de cólon apresentaram modificações complexas no perfil de N-glicosilação no soro, em relação ao soro de indivíduos sadios, com capacidade em separar casos de controles. No tecido tumoral ao

contrário, observou-se um aumento na expressão de N-glicanos, em especial formas bi- antenárias incompletas e multi-antenárias, sem correlação com o perfil de N-glicosilação

identificado no soro dos pacientes com câncer de cólon.