Efeito da curcumina no tratamento de micróglias infectadas pelo vírus Zika

Abstract

O relato de numerosos casos de microcefalia no Brasil entre 2015 e 2016 alertou a comunidade científica mundial. O principal motivo foi a sua relação com os casos de infecção pelo vírus Zika. A organização mundial da saúde alertou para a necessidade do desenvolvimento de tratamentos para a infecção e prevenções ao desenvolvimento da microcefalia. Neste contexto, a curcumina tem se mostrado uma molécula de interesse para estudos com o vírus Zika, pois há na literatura evidências da sua ação sobre os flavivírus e já está demonstrada sua capacidade anti-inflamatória. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a curcumina tem a capacidade de interferir nos mecanismos de morte celular e de autofagia induzidos pelo vírus e se esta molécula possui ação imunomoduladora, importante na prevenção da neuroinflamação que ocorre durante a infecção. A melhor compreensão destes mecanismos poderá contribuir para o desenvolvimento de novas medidas terapêuticas e diminuir a morbidade da infecção pelo vírus Zika. As micróglias murinas de linhagem BV2 foram infectadas com MOI 0,1 e MOI 1 do vírus Zika (cepa PE/243) e tratadas com 0,31 μM, 0,62 μM, 1,25 μM, 2,5 μM e 5 μM de curcumina. A viabilidade celular foi avaliada pelo teste de redução do MTT e lida em espectrofotômetro. A

expressão da caspase-3, da mTOR e da LC3 foram avaliadas por teste antígeno- anticorpo por citometria de fluxo. A morte celular foi avaliada pela marcação por anexina/iodeto de propídio, lido em citometria de fluxo. A produção de espécies reativas de oxigênio e de nitrogênio foram avaliadas pelas sondas DCF-DA e DAF-FM, respectivamente, em citometria de fluxo. A dosagem das citocinas foi realizada por kit CBA (BD), em citometria de fluxo. Os dados mostraram que o vírus Zika apresentou um efeito citopático sobre as células BV2 e a curcumina reverteu parcialmente esta citotoxicidade. Este efeito citopático do vírus foi resultado principalmente da indução da apoptose sem aumentar a produção de caspase-3 pelas micróglias. Já a curcumina, mesmo sem alterar o número de células apoptóticas, reduziu a sinalização pela caspase-3. Observamos também que o vírus Zika induz a autofagia nas micróglias sem alterar a expressão de mTOR, enquanto o tratamento com a curcumina induziu ainda mais a autofagia através da redução da expressão de mTOR. O vírus Zika induziu uma resposta inflamatória pelas células BV2 com aumento da produção de IFN-γ, TNF-α, IL-6, IL-10, IL-17, MCP-1. Esta resposta inflamatória foi controlada pela curcumina,

reduzindo a produção de IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, IFN-γ e TNF-α nos grupos de células infectadas com MOI 0,1 do vírus e que receberam o tratamento de 2,5 μM e 5 μM. Por fim, observamos que a infecção aumentou a produção de EROs pelas células BV2. Apenas as células estimuladas com MOI 0,1 apresentaram a produção aumentada de ERNS. Em contrapartida, células na presença de MOI 1 produziram menos ERNs. Em conclusão, observou-se que o tratamento com a curcumina apresentou um efeito pró-oxidante durante a infecção pelo vírus Zika.