Levantamento de novas espécies de begomovírus no Distrito Federal e em Goiás e caracterização molecular de uma nova espécie associada a tomateiro contendo Ty-1

Abstract

O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é cultivado em todas as principais regiões tropicais e subtropicais do Brasil e do mundo. O Estado de Goiás é um dos principais produtores de tomate para consumo in natura e para processamento no Brasil. O tomateiro apresenta uma grande vulnerabilidade à ação de pragas e agentes patogênicos. Dentre os agentes virais, isolados de espécies do gênero Begomovirus (família Geminiviridae) são responsáveis por perdas significativas de produção. Tais vírus podem apresentar um (espécies monopartidas) ou dois (espécies bipartidas) componentes genômicos de DNA circular fita simples, entre 2.600 a 2.800 nucleotídeos. No país, o elevado número de espécies classificadas no gênero Begomovirus ocorre por uma combinação de fatores incluindo a atividade polífaga do vetor mosca-branca (Bemisia tabaci Middle East Asian Minor – MEAM 1) e a grande capacidade de eventos geradores de variabidade no gênero Begomovirus. Devido a importância das doenças causadas por espécies de begomovírus no país, o constante monitoramento da diversidade viral e produção de clones infecciosos são ações de pesquisa de suma importância para programas de melhoramento visando o desenvolvimento de cultivares resistentes. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar prováveis novas espécies Begomovirus ocorrendo em cultivos de tomate em Goiás e no Distrito Federal. DNA foi extraído de 450 amostras foliares de tomate exibindo sintomas típicos de vírus de plantas, coletadas na região do Distrito Federal e Goiás e usado como molde em ensaios de PCR com os primers universais PAL1v1978/PAR1c496. Os amplicons obtidos tiveram suas sequências obtidas e um total de 23 isolados foram selecionados com base em sequências parciais com identidade inferior a 91% com o componente DNA-A de qualquer outra espécie de Begomovirus previamente descrita. Um conjunto adicional de primers universais foi utilizado visando recuperar o genoma das espécies virais nas 23 amostras. Sequências completas de três isolados foram recuperadas correspondendo a três prováveis espécies novas. Os demais isolados se encontram-se em fase final de caracterização. Um dos isolados (DF-640) foi caracterizado uma cultivar identificada como sendo portadora do gene Ty-1. O monômero referente ao componente DNA-A do isolado DF-640 apresentou 2.605 nucleotídeos e foi obtido com a enzima NdeI. O DNA-B apresentou de 2.625 nucleotídeos e foi obtido com BglII. O isolado DF-640 apresenta uma organização genômica típica de espécies bipartidas do Novo Mundo, com seis fases de leitura aberta (ORFs) presentes no DNA-A e duas ORFs no DNA-B. Análises de RDP4 evidenciaram eventos de recombinação nos dois componentes genômicos. Clones monoméricos para os componentes DNA-A e DNA-B do isolado DF-640 foram capazes de infectar tomate quando inoculados via bombardeamento. Clone multimérico foi obtido para o componente DNA-A. Estudos serão conduzidos futuramente para produção de clone multimérico para componente DNA-B e testes de inoculação serão realizados. Devido aos sintomas observados inicialmente em condições de campo, a espécie foi nomeada como Tomato mosaic severe dwarf virus (ToMSDV).