Atividade antitumoral de nanopartículas de maghemita associada ao citrato de ródio (II) em adenocarcinoma de próstata in vitro

Abstract

A próstata é uma glândula tubo alveolar. A principal função da próstata adulta é produzir componentes importantes do fluido seminal. A nanobiotecnologia surge como ferramenta multidisciplinar para resolver diversos problemas encontrados em várias áreas do conhecimento. Na saúde, para aplicações farmacológicas, a faixa de tamanho destas nanopartículas varia de 5 a 100 nm. Estudos recentes comprovaram que o agente inorgânico citrato de ródio, quando associado à nanopartículas de maghemita (Magh-Rh2(H2cit)4), possui estabilidade coloidal e atividade antitumoral em células de câncer de mama pela fragmentação do DNA. O objetivo do trabalho foi avaliar a atividade citotóxica do citrato de ródio II associado à NPs de maghemita (Magh-Rh2(H2cit)4) em células DU-145 in vitro. As linhagens celulares escolhidas para o desenvolvimento do projeto foram DU-145 e HNTMC. A caracterização da forma, morfologia, tamanho e fluorescência da nanopartícula foi investigada usando microscópio eletrônico de varredura (MEV), microscópio eletrônico de transmissão (MET), microscópio de fluorescência e espectrofluorimetria. A estabilidade da partícula foi avaliada no equipamento Zetasizer Nano ZS, aferido o diâmetro hidrodinâmico, potencial zeta e índice de polidispersão. Para as análises da capacidade anti-tumoral da Magh-Rh2(H2cit)4 foi ultilizado o teste de viabilidade celular por exclusão com azul de tripan, alterações morfológicas por MEV, alterações ultraestruturais por MET e internalização por meio de microscopias de fluorescência e MET. Para a identificação do tipo de morte celular (necrose ou apoptose) e alterações morfológicas foi ultilizado citometria de fluxo. Após três meses da síntese da NP o pH médio foi de 7,25. O diâmetro hidrodinamico médio foi de 125,15, o potencial zeta de superfície foi de –39,41 mV, com característica monodispersa com indice de polidisperssão 0,210. Esses dados revelam que a NP é estável, pois ela não sofre alterações consideráveis nos parâmetros avaliados ao longo do tempo, estes valores são próximos aos encontrados em trabalhos anteriores. O tamanho das NPs Magh-Rh2(H2cit)4 é um parâmetro importante a ser determinado, pois pode influenciar em sua atividade antitumoral. Os resultados obtidos por MET foram que a NP Magh-Rh2(H2cit)4 possui a característica de formação de grumos e que apresenta um tamanho de aproximadamente 15 nm. Por MEV foi possível observar a formação de aglomerados similar aos visualisados por MET, e confirmar a presença de ferro e ródio, por meio da ferramenta EDS. A análise de fluorescência no espectrofluorimetro revelou que a Magh-Rh2(H2cit)4 possue fluorescência excitada em 555 nm. O teste de viabilidade celular de exclusão por azul de tripan revelou a dosagem IC 50 de 400 μM. As alterações morfológicas por meio de MEV mostrou que em função dos tratamentos há uma redução dos prolongamentos celulares e alterações na superficie das células. O ensaio de MET mostrou que as NPs são internalizadas e permanecem em vesículas no citoplasma. Por meio de citometria de fluxo foi possível constatar que a morte celular se dá por necrose e apoptose, sendo a apoptose responsável por cerca de 75% da morte total. As análises indicam real potencial antitumoral da Magh-Rh2(H2cit)4 em células de adenocarcinoma de próstata, ainda, a NP por possuir fluorescência é uma promissora ferramenta de diagnóstico, no entanto, ainda é necessário outros estudos, principalmente in vivo.