Efeito de diferentes sistemas de maturação no acúmulo de lipídios em ovócitos bovinos

Abstract

Trabalhos recentes têm demonstrado que a maturação in vitro (MIV) acarreta um maior acúmulo de lipídios no ovócito, o que se reflete na qualidade dos embriões produzidos. Esse acúmulo pode ser devido a retirada prematura dos ovócitos dos folículos ou ao ambiente in vitro propriamente dito, já que não ocorre quando os ovócitos são maturados in vivo. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de três sistema de maturação: in vitro (MatV), in vivo (MatS) e Transferência intrafolicular de ovócitos imaturos (TIFOI; MatT), no acúmulo de lipídios em ovócitos bovinos. Os ovócitos foram maturados, em seus respectivos sistemas de maturação, por vinte e duas horas e, apenas os ovócitos com a presença do corpúsculo polar foram utilizados para as análises. A presença e quantificação de lipídios foi realizada pela coloração com Bodipy 493/503 em Microsocopia Confocal e por Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Foi também avaliada a expressão de genes relacionados ao metabolismo de lipídios por PCR em tempo real (qPCR) (Acyl-CoA Synthetase Short Chain Family Member 2, ACSS2; Fatty Acid Elongase 1, ELOVL1; Fatty Acid Binding Protein 3, FABP3). Dados relativos à cinética de maturação nuclear, quantificação do acúmulo de gotas lipídicas e expressão

gênica, foram analisados pelo teste Qui-quadrado, ANOVA (GLIMMIX) e Kruskal- Wallis, respectivamente. Para todas as análises um nível de significância de 5%

(p<0,05%) foi considerado. A média da área ocupada pelos lipídios nos ovócitos imaturos (IMA; 13% ±1.9) foi similar (p>0,05%) aos ovócitos maturados in vivo (MatS= 16% ± 1,7 e MatT= 12% ± 1,9). Entretanto, nos ovócitos maturados in vitro (MatV), houve um aumento no acúmulo de lipídios (24% ±1,9) durante a maturação sendo maior do que nos outros grupos (p<0,001). Na avaliação ultraestrutural os ovócitos MatV apresentaram uma maior presença de lipídios. Contudo, todos os grupos foram semelhantes quanto a organização dos grânulos corticais e mitocôndrias. A expressão dos genes ACSS2,

ELOVL1 e FABP3 foram semelhantes entre os grupos MatS e MatT (p > 0,05%), contudo, os ovócitos MatS também foram semelhantes (p > 0,05%) aos MatV. Pela primeira vez, foi demonstrado que ovócitos maturados pela TIFOI são semelhantes aos ovócitos maturados in vivo, quanto ao acúmulo de lipídios, o que implica na superior qualidade quando comparado com os in vitro. Este novo método de maturação abre novas possibilidades para as biotecnologias que necessitam da maturação de ovócitos como a PIVE, criopreservação de ovócitos e embriões, clonagem e transgenia.