Avaliação dos genes de herpesvírus bovino tipo 5 no controle da apoptose

Abstract

O Alphaherpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5) é um dos principais agentes responsáveis pela meningoencefalite em bovinos no Brasil, causando perdas econômicas significativas. Sabe-se que outros vírus da família Herpesviridae, como o Alphaherpesvirus bovino tipo 1, o Alphaherpesvirus suíno tipo 1 e o Alphaherpesvirus humano tipo 1 e 2, codificam genes homólogos ao BoHV-5, com reconhecida ação no controle da apoptose. O objetivo deste trabalho foi expressar o gene BoHV-5 US3 em um sistema de expressão baseado em baculovírus para a produção da proteína serina/treonina quinase e avaliar sua atividade no controle da apoptose in vitro. Um baculovírus recombinante derivado do Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) contendo o gene US3 e uma deleção no gene p35 anti-apoptótico de baculovírus foi construído usando o sistema Bac-to-BacTM. Este baculovírus recombinante foi utilizado para avaliar a atividade anti-apoptótica do gene US3 em células de inseto comparando-o com outros dois recombinantes de AcMNPV. Um vírus contendo uma cópia funcional do gene anti-apoptótico p35 de AcMNPV e outro AcMNPV p35 knockout com o gene iap-3 anti-apoptótico do vírus Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV). Descobrimos que o nível de caspase (indicador de apoptose) foi maior nas células de inseto infectadas com o vírus recombinante contendo o gene US3 do que nas células infectadas com os recombinantes AcMNPV com os genes p35 e iap-3. Além disso, o gene iap-3 AgMNPV foi capaz de substituir eficientemente o gene p35 no controle da apoptose durante a infecção de células de insetos pelo recombinante AcMNPV contendo o gene iap-3. Estes resultados indicam que o gene da proteína quinase BoHV-5 US3 não é capaz de bloquear a apoptose em células de inseto induzidas pela infecção de um AcMNPV p35 knockout.