Quantificação de microRNAs ligados à epileptogênese em amostras biológicas de animais epilépticos

Abstract

A epilepsia canina é a doença neurológica mais comum na Medicina Veterinária. O diagnóstico clínico de pacientes com epilepsia idiopática requer exame neurológico, juntamente com exames laboratoriais e de imagens. No entanto, o diagnóstico errôneo da epilepsia ocorre com frequência na rotina clínica. microRNAs circulantes representam importantes biomarcadores de doenças cerebrais. Examinamos cinco microRNAs, miR-34a, -134, -132, -382 e -26a, para a escolha de um alvo e de um microRNA endógeno calibrador. MiR-26a e miR-382 foram os melhores candidatos a alvo e a calibrador, respectivamente. Em seguida, testamos nosso protocolo de RT-qPCR em um grupo de indivíduos epilépticos (N = 10) em comparação com indivíduos saudáveis (N = 10). Cães epilépticos mostraram tendência de aumento de 1,45 vezes no conteúdo de miR-26a no plasma em comparação aos animais sadios (P = 0,2749). Essa assinatura foi encontrada em 70% dos cães com epilepsia idiopática, revelando a sensibilidade do método. Também verificamos satisfatória especificidade, uma vez que apenas 20% dos animais controles saudáveis foram falsos positivos. A acurácea foi estimada mediante determinação da área sob a curva (AUC, area under the curve) de acordo com análise de curva ROC (Receiver operating characteristic), obtendo-se o valor de 0,61. Este resultado sugere que miR-26a tem potencial para uso em combinação com outros microRNAs que ofereçam maiores valores de AUC, as denominadas assinaturas de múltiplos alvos, mas não como um biomarcador único para a epilepsia canina. O presente trabalho padronizou um método de RT-qPCR capaz de identificar microRNAs expressos aberrantemente em amostras de plasma de cães diagnosticados com epilepsia idiopática. Nosso estudo também revelou um calibrador estável para ensaios futuros de RT-qPCR com cães epilépticos, miR-382, e um potencial alvo para assinaturas de microRNAs ligados à epilepsia canina, miR-26a.