Caracterização química de inibidores de serino proteases isoladas a partir da secreção cutânea de Pithecopus (Phyllomedusa) azureus (Amphibia, Anura, Phyllomedusidae)

Abstract

A família Phyllomedusidae se destaca entre os anfíbios por ser uma rica fonte de peptídeos antimicrobianos (PAMs), e esses peptídeos estão agrupadas em famílias de acordo com a similaridade: Dermaseptinas, Phylloseptinas, Plasticininas, Dermatoxinas e Phylloxinas. Além dos peptídeos antimicrobianos, existe outra classe de peptídeos importantes como os inibidores de proteases, que atuam ligando-se às proteases impedindo a sua função, e inativando-as. A secreção cutânea de Pithecopus (Phyllomedusa) azureus tem sido bastante investigada no que diz respeito à presença de compostos antimicrobianos, no entanto pouco se sabe a respeito de outras classes de moléculas presentes na secreção deste animal. Neste trabalho foi isolado um inibidor de tripsina a partir da secreção cutânea de P. azureus. Os resultados apresentaram um potente inibidor de tripsina (Ki=1nM), e inibição do tipo competitiva, que apresenta alta similaridade com PSKP-I de P. sauvagii. Esta proteína foi isolada e caracterizada por HPLC em duas etapas e sequenciamento de novo. A massa molecular do componente principal foi estabelecida por LC-MS/MS como 5898 Da. Além disso, este inibidor se mostrou bastante estável em diversos pHs e temperaturas apesar de perder atividade mesmo em baixas concentrações de DTT; no entanto, não apresentou atividade hemaglutinante ou antitumoral nas concentrações testadas. Este novo inibidor isolado a partir da secreção cutânea de um anfíbio amplia o conhecimento a respeito desta rica fonte de compostos com amplo potencial biotecnológico.