Atividade antiepiléptica e neuroprotetora do peptídeo neurovespina em um modelo crônico de Epilepsia do Lobo Temporal e avaliação da sua toxicidade aguda em camundongos Swiss

Abstract

A epilepsia do lobo temporal (ELT) é o subtipo mais comum de epilepsia focal em adultos. O tratamento da ELT é feito com fármacos antiepilépticos (FAE), no entanto, os efeitos adversos, os altos custos e uma baixa taxa de controle total das crises alcançando apenas 11% dos pacientes geram restrições severas ao seu uso. Desde 1937, modelos animais tem sido o alicerce para a identificação de novas terapias para a epilepsia. Um dos modelos mais amplamente utilizados no estudo da ELT é o modelo crônico pós indução de status epilepticus (SE) através da injeção intraperitoneal (i.p.) de pilocarpina, que provoca crises espontâneas e recorrentes (CERs) e uma esclerose hipocampal similar à observada em pacientes com ELT e por isso tem sido extensamente utilizado no estudo e na busca por novos tratamentos. Nos últimos anos, diversos compostos isolados da peçonha de vespas com atividade no SNC de mamíferos têm sido descritas, especialmente os peptídeos. Com base nisso, o objetivo do nosso estudo foi avaliar a capacidade do peptídeo neurovespina (um novo peptídeo similar ao encontrado na vespa social Polybia occidentalis) em prevenir CERs e a perda neuronal na formação hipocampal em duas fases distintas do modelo crônico de ELT: neuroprotetora e epiléptica; avaliar o perfil de toxicidade aguda do peptídeo e avaliar os padrões epileptiformes por Vídeo-EEG. Para avaliar a atividade antiepiléptica, os sujeitos experimentais receberam injeções intraperitoneais (i.p.) do peptídeo neurovespina (doses: 4, 2 ou 1 mg /Kg), do fármaco Diazepam -DZP- (4 mg/Kg) ou solução salina (grupo controle) durante o período crônico do modelo. Na avaliação da atividade neuroprotetora, os animais receberam injeções i.p. do peptídeo neurovespina (doses: 8, 4 ou 2,5 mg /Kg) ou solução salina (grupo controle) durante o período latente do modelo. Nas duas avaliações, a ocorrência das CERs foi observada durante 15 dias através da filmagem dos animais (9 horas / dia) no período crônico. Ao término dese período, foi feita a avaliação das CERs em cada grupo experimental, onde foram contabilizados o tempo (em segundos), a quantidade (n) e a categorização das crises apresentadas segundo Índice de Racine. Após a avaliação do efeito antiepiléptico, o cálculo da DE90 (3.43 mg/Kg) foi estimado a partir da curva dose-resposta, sendo a dose utilizada para a obtenção dos padrões epileptiformes por Vídeo-EEG. Para avaliação da toxicidade aguda, os sujeitos foram submetidos ao protocolo experimental de atividade citotóxica e genotóxica através do teste de proliferação de eritrócitos em medula óssea e para avaliação hematotóxica, o sangue foi obtido através de punção cardíaca e a análise foi realizada em um hematímetro automatizado, calibrado para camundongos. Nossos resultados mostraram que o peptídeo neurovespina, na avaliação da atividade antiepiléptica, foi capaz de reduzir o tempo e o número de CERs em todas as doses avaliadas. Além disso, a neurodegeneração na formação hipocampal também foi diminuída. Na avaliação dos padrões epileptiformes, a DE90 do peptídeo foi capaz de proteger os animais contra CERs nas primeiras 5 horas após o tratamento. Em relação à avaliação da atividade neuroprotetora, o peptídeo foi capaz de reduzir a frequência, a duração e a gravidade das crises. Somado a isso, a neurodegeneração foi diminuída em todas as regiões analisadas da formação hipocampal na dose de 8 mg/Kg. Ademais, nos testes de toxicidade, o peptídeo não apresentou potencial genotóxico, citotóxico ou hematotóxico, demonstrando sua alta segurança farmacológica. Estes dados indicam que o peptídeo neurovespina tem potencial para o desenvolvimento de novos fármacos para doenças neurológicas, tanto por reduzir a frequência das crises como por minimizar os danos neuronais, além disso, pode ser usado como uma ferramenta na pesquisa em neurociência.