Assinatura estriatal de micrornas no modelo da rotenona e sua modulação por oligonucleotídeo sintético carreado por nanopartícula magnética

Abstract

A doença de Parkinson (DP) é uma desordem cerebral complexa que afeta cerca de 3% da população mundial acima de 65 anos. Os sinais motores característicos da doença incluem rigidez, tremores e bradicinesia, sendo resultados da degeneração progressiva de neurônios dopaminérgicos da substância negra pars compacta. Um fator agravante da doença consiste no seu diagnóstico: pacientes quando identificados clinicamente com Parkinson já apresentam perda de 40 - 60% de neurônios dopaminérgicos. O tratamento considerado padrão para DP consiste na reposição do neurotransmissor dopamina mediante medicação com L-dopa. No entanto, é apenas sintomático, e mais efetivo nos estágios iniciais da doença. Além disso, seu uso crônico induz severos efeitos colaterais motores, as discinesias. Fármacos modificadores da doença - disease modifying drugs - capazes de retardar a progressão parkinsoniana possuem potencial em mudar o prognóstico da desordem, mas ainda estão em fase de testes. MicroRNAs são potenciais alvos terapêuticos. O presente trabalho objetivou investigar se microRNAs são expressos de maneira aberrante no estriado de animais parkinsonianos (etapa 1), e se é viável modular esta expressão mediante injeção intracerebroventricular (i.c.v.) de oligonucleotídeos sintéticos carreados por nanopartículas magnéticas (etapa 2). Nesta primeira etapa, ratos receberam injeções da neurotoxina rotenona (2,5 mg/kg, i.p., diariamente por dez dias). A neurotoxina causou prejuízo motor, neurodegeneração com perda de células TH (+) nigroestriatais, bem como neuroinflamação, aqui evidenciada pela microgliose. MicroRNAs apresentaram-se aberrantemente expressos no estriado destes animais, havendo aumento significativo de miR-26a, miR-132 e miR-34a, e depleção de miR-7 e Let7a. Uma vez confirmada a hipótese da expressão aberrante dos miRNAs, a segunda etapa do trabalho consistiu em avaliar o delivery cerebral de modulares de miRNAs por partículas magnéticas - NeuroMag – injetados no ventrículo lateral por cirurgia estereotáxica. NeuroMag transfectou de forma eficiente os oligos no estriado. Oligos marcados com fluoresceína foram visualizados em neurônios estriatais e astrócitos, mediante microscopia confocal. Finalmente, avaliamos se os efeitos da reposição do microRNA-7 (miR-7 mimic, 0,36nmol) carreados por NeuroMag (0,68μL) via injeção i.c.v., em animais submetidos à rotenona por dez dias consecutivos (3mg/kg, i.p.). Os resultados revelaram que o grupo rotenona previamente transfectado com Mimics7 apresentou maior expressão de neurônios nigrais TH positivos, assim como reduzida microgliose na substância negra em relação ao grupo NeuroMag. Tais resultados sugerem que a estratégia de modulação de miR-7 via oligonucleotídeos sintéticos carreados por NeuroMag possui potencial neuroprotetor no modelo de neurodegeneração induzido por rotenona.