Avaliação do uso de imagens digitais para determinações quantitativas em eletroforese em gel

Abstract

Eletroforese em gel(GE) é uma técnica de separação muito utilizada em análises biológicas, principalmente na separação de macromoléculas como proteínas e ácidos nucléicos. Sua aplicação em determinações químicas quantitativas ordinárias é muito restrita devida às dificuldades para a obtenção de um sinal analítico que possa ser relacionado com as concentrações. Nesse sentido, o presente trabalho propõe a combinação da GE e da detecção baseada em imagens digitais em tempo real para a separação e quantificação de compostos com baixo peso molecular. Nos estudos realizados foi demonstrada a possibilidade de separação e quantificação dos complexos de cobre e níquel com negro de eriocromo T e dos corantes artificiais alimentícios: azul brilhante, amaranto, amarelo tartrazina e amarelo crepúsculo. A partir dos eletroferogramas obtidos com o uso de um programa desenvolvido no laboratório e de uma webcam para aquisição das componentes RGB das imagens foi possível obter curvas analíticas com adequadas linearidades (R > 0,99) para todos os analitos estudados. A estratégia proposta foi aplicada inicialmente para determinação de cobre e níquel em ligas metálicas, não sendo observadas diferenças significativas nos resultados obtidos em relação àqueles adquiridos por absorção atômica em chama ao nível de 95% de confiança. Além disso, precisões da ordem de 5% foram estimadas para as medidas. A avaliação da estratégia proposta para a quantificação de corantes foi realizada por testes de recuperação em refrescos em pó, sendo alcançados valores entre 93,3% a 107,7% que demonstraram uma exatidão adequada para o método proposto. Adicionalmente, coeficientes de variação da ordem de 5% indicaram uma precisão adequada para a estratégia de medida proposta. Os estudos relatados neste trabalho demonstram um bom desempenho analítico da técnica e abre a possibilidade de sua aplicação para diferentes amostras e analitos em trabalhos futuros.