Padrões de ativação do inflamassoma pelas vesículas extracelulares dos isolados do fungo Cryptococcus neoformans obtidas em diferentes condições nutricionais

Abstract

Cryptococcus neoformans é um fungo patogênico humano que infecta principalmente pacientes imunocomprometidos causando criptococose. Entre outras, uma das suas estratégias de virulência é a secreção de vesículas extracelulares (EVs) contendo polissacarídeos importantes com características imuno-modulatórias. Sabe-se que diferentes sorotipos de C. neoformans produzem diferentes respostas inflamatórias quando incubadas com macrófagos e, dependendo da condição de crescimento, estes fungos liberam metabólitos e fatores de virulência em diferentes concentrações. Assim, mostramos que, dependendo da composição do meio de cultura, C. neoformans produz diferentes fatores de virulência e diferentes vesículas extracelulares. Avaliamos as características das vesículas extracelulares produzidas por sorotipos capsulares e acapsulares de C. neoformans (B3501 e ΔCap67) crescendo no meio de cultura Sabouraud Dextrose Broth em diferentes concentrações nutricionais (10%, 50% e 100%) ou um meio pobre (Meio Mínimo). Afim de entender melhor a influência das EVs na modulação do inflamassoma dependendo das condições nutri-cionais, elas foram incubadas com macrófagos derivados da medula óssea (BMDMs) e células dendríticas (BMDCs) de camundongos C57BL/6 e as citocinas do sobrenadante foram quantificadas por ELISA. Além disso, foram realizados experimentos in vivo para analisar os genes do inflamassoma ativados durante a infecção com C. neoformans após o tratamento com as EVs. Os resultados mostraram que, quanto maior a concentração nutricional no meio de cultura C. neoformans produz EVs com menor tamanho hidrodinâmico e menos compostos de virulência. Apesar disso, ao interagirem com BMDMs e BMDCs, essas EVs induzem uma menor produção de IL-1β em relação às EVs produzidas no meio nutricionalmente pobre. Quando utili-zadas como tratamento em camundongos infectados com C. neoformans, as EVs produzidas no meio rico inibiram a maioria dos genes relacionados ao inflamassoma em relação aos camundongos infectados que não receberam tratamento. Tais resultados indicam que provavelmente as EVs estão relacionadas ao pro-cesso de disseminação do C. neoformans dos pulmões até o SNC do hospedeiro, considerando que, duran-te a infecção, o fungo enfrenta diferentes condições nutricionais nos tecidos pelos quais percorre até alcan-çar o tecido cerebral. Assim, a baixa disponibilidade de nutrientes encontrada no tecido inflamado dos pul-mões estimularia a produção de EVs com função imuno-estimulatória que provocaria um maior recrutamento de macrófagos e internalização de leveduras. As leveduras, protegidas no interior dos macrófagos, conseguiriam se disseminar pelo organismo, sem ativar o sistema imune, até chegar ao SNC, tecido com maior disponibilidade de nutrientes e, onde o fungo produziria EVs com funções imunoinibitórias e conseguiria se manter estável. Dessa forma, tais resultados mostram mais uma vez a importância das EVs no processo de infecção pelo C. neoformans, podendo ser alvo de estudos para desenvolvimento de tratamento para a criptococose.