PD-L1 pode mediar a exaustão de células T em um caso de leishmaniose cutâneo difusa causada pela Leishmania (L.) Amazonensis

Abstract

Introdução: A leishmaniose cutâneo difusa é uma forma rara da leishmaniose tegumentar americana associada à infecção pela Leishmania (L.) amazonensis no Brasil. Representando o polo anérgico da Leishmaniose tegumentar americana, mas explicações para a sua resistência ao tratamento ainda são obscuras. Objetivos: Investigar o papel da via PD1/PD-L1 na exaustão celular da leishmaniose cutâneo difusa causada por Leishmania (L.) amazonensis, através de experimento ex vivo e in vitro após 48h de estímulo com o antígeno de Leishmania (L.) amazonensis. Métodos: A definição do caso de leishmaniose cutânea difusa foi realizado de acordo com os critérios clínicos, laboratoriais e histopatológicos presentes na literatura e através da identificação da espécie de Leishmania responsável. Clinicamente o sujeito apresentava placa eritematosa elevada em dorso nasal de crescimento lento e que surgiu durante viagem à região Amazônica, a imunofluorescência indireta e a intradermo reação de Montenegro foram negativas, a cultura e o exame direto da lesão foram positivos para Leishmania spp. A reação em cadeia da polimerase ITS1PCR identificou Leishmania (L.) amazonensis. O sangue periférico do sujeito da pesquisa foi colhido para o experimento 11 meses após o início do tratamento, quando o mesmo já não apresentava lesão clinicamente evidente. A células mononucleares de sangue periférico foram analisadas ex vivo e in vitro após 48 horas de estimulação com antígeno solúvel de Leishmania (L.) amazonensis. As células foram marcadas para proteínas de superfície celular possivelmente envolvidas na patogênese da leishmaniose cutânea difusa, segundo estudos anteriores [CD14, CD40, CD44, CD80, ligante da proteína de morte celular programada 1 (PD-L1), HLA-DR, CD86, CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD45RA, e CD25], bem como para as moléculas intracelulares interferon gama e granzima B e para marcadores de morte celular. Foi realizada revisão narrativa da literatura de forma a correlacionar os achados do estudo aos já descritos por outros trabalhos. Resultados: A análise das moléculas de superfície mostrou expressão de PD-L1, um ligante inibitório, nos monócitos estimulados com o antígeno solúvel de Leishmania (65% das células), enquanto em monócitos não estimulados (controle negativo), esta molécula foi expressa em apenas 35% das células. Por outro lado, observamos uma diminuição de linfócitos CD4+IFN-γ+ (8.32% versus 1.7%) e de linfócitos CD8+ IFN-γ+ (14% versus 1%), quando comparamos as células estimuladas com o controle negativo. Um decréscimo relevante na expressão de granzima B em células T CD8+ após o estímulo com o antígeno solúvel de Leishmania também foi observado, estando presente em 31% no controle negativo, mas somente em 5% no grupo que recebeu o estímulo. A expressão de moléculas coestimulatórias CD40 e CD86 foi semelhante entre as células que receberam o estímulo do SLA e o controle negativo. Conclusão: A ativação da via inibitória PD-L1 após a reestimulação com o antígeno de Leishmania pode estar relacionada a expressão diminuída de IFN-γ em linfócitos T CD8+ e CD4+, e de granzima B em linfócitos T CD8+. A ativação desta via inibitória é uma das hipóteses para explicar a falta de resposta ao tratamento de paciente com leishmaniose difusa ou LCD.