Análise in vitro da atividade antitumoral de derivados de segunda geração da 3,4-dihidropirimidinona (DHPM’s)

Abstract

O câncer é considerado um dos maiores problemas de saúde pública mundial. Tendo em vista a grande necessidade de desenvolver tratamentos mais eficazes para essa doença, estudamos derivados de segunda geração da 3,4-dihidropirimidina-2(1H)-ona (ou tiona) DHPMs, uma classe de moléculas inibidoras da proteína motora do fuso, cinesina Eg5, que apresenta pronunciada atividade antitumoral contra várias linhagens celulares de câncer. Inicialmente, foi realizada uma triagem in vitro para identificar derivados de DHPMs (TZD 06, 07, 08, 09, 14 e 15) com potente efeito citotóxico sobre células de linhagem MCF-7, MDA-MB-231, A2780, T47-D, DU-145, CACO-2, CAPAN-2 e PANC-1 através do ensaio de viabilidade celular do MTT. Os compostos foram avaliados quanto a sua concentração inibitória 50 (IC50) a partir de 72 horas de tratamento nas linhagens que foram sensíveis na menor concentração da triagem, A2780 e MDA-MB- 231, e quanto a concentração máxima não citotóxica em células normais HUVEC e fibroblastos. A linhagem que apresentou melhor resultado foi a A2780 e, portanto, a escolhida para seguir com os demais testes com os compostos selecionados TZD 06, TZD 07, TZD 14 e TZD 15. Após receber os tratamentos, a morfologia das células foi analisada em microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura. Os efeitos do tratamento com DHPMs na formação do fuso mitótico foram avaliados através da marcação imunofluorescente da alfa-tubulina analisada por microscopia confocal de varredura a laser. Além disso, a análise do perfil de indução da morte celular, do ciclo celular e da proliferação celular foi realizada por citometria de fluxo para avaliar a influência dos DHPMs selecionados. Foi observada alteração da morfologia das células como redução de pontos de adesão focal, arredondamento da célula, retração do citoplasma e formação de protrusões nas membranas. Após 24 horas de tratamento com a dose máxima não citotóxica, as células A2780 em divisão exibiram o fuso monoastral, o que confirma a atividade dos derivados de DHPM similar a do monastrol. O tratamento com os compostos TZD 06 e TZD 14 por 72 horas induziu a morte celular por apoptose mas não houve alteração estatisticamente significante do ciclo celular. O índice de proliferação das células A2780 foi reduzido significativamente após receber o tratamento com os compostos TZD 06, TZD 14 e TZD 15 na concentração do IC50. Esses resultados sugerem que os derivados de segunda geração de DHPMs testados inibem características tumorigênicas importantes das células cancerosas e que a estrutura molecular desses compostos possa ser uma alternativa promissora para a quimioterapia do câncer de ovário.