Aspectos imunológicos e moleculares correlacionados às manifestações clínicas da Leishmaniose tegumentar americana

Abstract

A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença tropical negligenciada causada por protozoários do gênero Leishmania. A transmissão ocorre principalmente pela picada de flebotomíneos fêmeas infectadas. A LTA apresenta um amplo espectro de manifestações clínicas classificadas como leishmaniose cutânea localizada (LCL), leishmaniose cutânea disseminada (LCDs), leishmaniose cutânea difusa (LCDf) e leishmaniose mucocutânea (LMC). Os mecanismos envolvidos no desenvolvimento e progressão das lesões ainda não estão completamente elucidados, sendo essencial conhecer os fatores que atuam na patogênese da doença e como eles contribuem para a diversidade de apresentações dos sintomas para melhor atendimento e tratamento dos pacientes. Neste trabalho, avaliou-se aspectos imunológicos e moleculares da LTA em indivíduos provenientes de áreas endêmicas do Brasil a fim de se verificar como esses aspectos estão associados às diversas manifestações clínicas da doença. A população do estudo foi composta por 30 pacientes provenientes de Corte de Pedra (Bahia) e 45 pacientes de diversas localidades atendidos no Hospital Universitário de Brasília (HUB) (Distrito Federal). Os indivíduos foram avaliados quanto à sintomatologia, sexo, idade, procedência, carga parasitária, produção de anticorpos e de citocinas. Além disso, foi analisada a influência da diversidade do parasito pela identificação de espécies de Leishmania e foi realizada pesquisa do vírus de RNA de Leishmania (LRV1) nas amostras. Foram coletadas amostras de sangue e de soro de todos os pacientes e biópsias dos indivíduos que apresentavam lesões ativas. A parasitemia foi determinada por qPCR direcionada ao kDNA do parasito e a presença do LRV1 foi avaliada por qRT-PCR e RT-PCR. A identificação das espécies de Leishmania se deu mediante sequenciamento dos produtos de PCR da região espaçadora do gene de RNA ribossomal ITS1. O método sorológico ELISA foi utilizado para a determinação de IgG anti-Leishmania e a citometria de fluxo para a dosagem das citocinas. Dos 75 pacientes avaliados, 23 (31%) pacientes eram assintomáticos, 34 (45%) pacientes apresentaram LCL primária, 10 (13%) pacientes apresentavam LCL recidiva e oito (11%) pacientes apresentavam LMC. O diagnóstico sorológico identificou 60 (80%) casos positivos e foi mais sensível para o grupo assintomático. As citocinas TNF, IFN-y, IL-17A e IL-2 foram diretamente relacionadas a grupos clínicos específicos. As diferenças nas concentrações de citocinas e sua correlação com os grupos clínicos avaliados reforçam a importância do sistema imune do hospedeiro na manifestação dos sintomas. O teste molecular detectou 45 (60%) pacientes positivos, sendo que a maior carga parasitária foi relatada em pacientes de Corte de Pedra com lesão ativa. As espécies L. amazonensis, L. braziliensis e L. guyanensis foram identificadas. Não foi demonstrada diferença estatística significativa na titulação de anticorpos e na carga parasitária entre os indivíduos com diferentes manifestações clínicas, não sendo possível relacionar esses fatores à severidade dos sintomas. Ademais, o LRV1 não foi detectado em nenhuma amostra. Isso nos levou a realizar experimentos in vitro com a finalidade de avaliar a influência do LRV1 na infectividade e na resposta ao tratamento com antimonial pentavalente e anfotericina B. Os resultados indicaram que o LRV1 não altera a taxa de infectividade das espécies de Leishmania, porém sua presença pode estar relacionada à resistência ao tratamento com antimonial pentavalente. Os resultados obtidos corroboram que múltiplos fatores atuam em associações complexas para resultar no amplo espectro sintomático da LTA, contudo é necessária a realização de novos estudos, com número amostral maior, para que se possa expandir o conhecimento acerca desses fatores.