Obtenção de extratos padronizados em ácido clorogênico, rutina e isoquercitrina a partir das folhas de Morus nigra L. : inibição de tirosinase e citotoxicidade

Abstract

A melanogênese é um processo responsável pela produção de melanina, a qual é armazenada em melanócitos, que contêm tirosinase. Esta enzima é responsável pela hiperpigmentação da pele devido à superprodução de melanina. A inibição desta enzima é um alvo na indústria dos cosméticos, uma vez que controla condições indesejáveis da pele. Espécies de plantas do género Morus são conhecidas pelos usos benéficos oferecidos em diferentes partes da planta, incluindo a inibição da tirosinase. Assim, este projeto teve como objetivo estudar a atividade inibitória da tirosinase por extratos das folhas de Morusnigra, bem como a caracterização do perfil cromatográfico do seu extrato e viabilidade de incorporação em produtos cosméticos a partir de sua citotoxicidade, a fim de tornar-se uma nova opção terapêutica de fonte natural. Folhas de M. nigra foram coletadas, pulverizadas, igualmente divididas em cinco lotes e o extrato padronizado foi obtido por maceração passiva. Não houve diferença significativa entre os lotes para teor de sólidos totais, rendimento e teor de umidade, o que demonstra uma boa reprodutibilidade do processo de extração, também demonstrado pelo perfil cromatográfico de CCD. Atividade enzimática de tirosinase foi determinada para cada lote, fornecendo a percentagem de inibição da enzima e os valores de IC50 obtidos através da construção de curvas dose-resposta e comparados com o ácido kójico, um inibidor conhecido da tirosinase. Alta atividade de inibição da tirosinase foi observada (acima de 90% a 15,625 g/mL) e valores de IC50 entre 5,00 g/mL ± 0,23 e 8,49 g/mL ± 0,59, comparável ao ácido kójico (3,37 g/mL ± 0,65). De acordo com as diretrizes da ICH e da Anvisa, o método cromatográfico empregado utilizando Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) foi validado. A análise por CLAE revelou a presença de ácido clorogênico, rutina e, seu composto majoritário, isoquercitrina. Desta forma, o extrato padronizado das folhas de M. nigra foi padronizado utilizando estes polifenóis como marcadores. A citotoxicidade foi avaliada pelo ensaio MTT em melanomas de murino (B16F10), queratinócitos humano (HaCat) e fibroblastos de camundongo (L-929). Não foi observada citotoxicidade para as linhagens celulares nos valores de IC50 da tirosinase. Este estudo demonstrou o potencial do extrato de M. nigra como um promissor agente de branqueamento de fonte natural contra hiperpigmentação cutânea.