Avaliação da citotoxicidade do extrato do ferrão de arraia Potamotrygon falkneri (Myliobatiformes:Potamotrygonidae)

Abstract

Em diversas regiões brasileiras os acidentes provocados por arraias dulcícolas são temidos por serem causa comum de necrose tissular e infecções bacterianas secundárias, que frequentemente implicam em incapacidade física temporária ou permanente. Estudos anteriores relatam a presença de atividades tóxicas, dentre as quais cardiotoxicidade, hiperalgesia, necrosante e edematogênica. Entretanto componentes envolvidos na citotoxicidade permaneciam sem caracterização. Identificação destes componentes é útil para a busca de tratamentos mais eficazes para este tipo de acidente. O presente trabalho objetivou identificar e caracterizar componentes citotóxicos do extrato do epitélio glandular que reveste o ferrão da arraia Potamotrygon falkneri. Os resultados obtidos evidenciam que o extrato obtido de um ferrão desta arraia possui aproximadamente 86 μg de protéinas, e seu perfil cromatográfico revelou 6 regiões com massa molecular variando de 14,4 a 97 kDa quando analisadas em SDS-PAGE. O extrato bruto do ferrão apresentou atividade hemolítica, fosfolipásica e citotóxica. 34 μg/mL do extrato bruto induziu 59 % de hemólise e a atividade fosfolipásica na presença de cálcio foi de 28.276 U/mg de proteína, enquanto na ausência de cálcio foi de 22.680 U/mg. O ensaio de citotoxicidade do extrato bruto foi realizado pelo método exclusão de azul de trypan na linhagem H9 em 6, 12 e 24 horas, resultando positivo no tempo de 24 horas. O extrato bruto e as regiões cromatográficas foram submetidas ao ensaio citotóxico e hemolítico, do qual uma fração apresentou índice citotóxico (região 1) e outra região apresentou hemolítico de 26% (região 5). O ensaio de citotoxicidade da região 5 também revelou citotoxicidade, além da capacidade hemolítica. A fração hemolítica e citotóxica foi purificada e submetida a espectrometria de massa, revelando três componentes com massas de 11.330,146 Da, 13.577,574 Da e 16.808,068 Da. Por fim, realizou-se o teste de hemólise indireta de fosfolipase A2 nesta fração, resultando em uma atividade de 103, 33 U/mg de fração. O presente trabalho, portanto, evidencia a presença de enzima fosfolipase A2, com atividade citotóxica em hemácias e células H9, no extrato da peçonha de P. falkneri e na fração estudada.