Análise molecular em pacientes com neoplasias hematopoiéticas : alterações cromossômicas e expressão do gene SIDT1

Abstract

A leucemia é um grupo heterogêneo de neoplasias hematológicas resultante de várias alterações genéticas. A análise das alterações cromossômicas em pacientes com leucemia tem uma aplicação direta no diagnóstico, prognóstico e tratamento. Além disso, o estudo da expressão gênica oferece uma importante fonte para compreender as consequências moleculares das alterações genéticas em leucemia. Os objetivos desse trabalho foram: (a) identificar a presença de alterações cromossômicas em pacientes ao diagnóstico com hipótese de LLA B, LMA e LMC atendidos no Hospital de Base do Distrito Federal, possibilitando a incorporação do protocolo de diagnóstico molecular; (b) analisar o perfil da expressão do gene SIDT1 em amostras clínicas leucêmicas ao diagnóstico, linhagens de células leucêmicas e em indivíduos não leucêmicos. Deste modo, a detecção das alterações cromossômicas foi realizada em 48 amostras com suspeita de leucemia. As alterações cromossômicas recorrentes detectadas foram: BCR-ABL1, p190 (1), E2A-PBX1 (1), PML-RAR_ (2) e BCR-ABL1, p210 (9). A análise quantitativa da expressão do gene SIDT1 foi realizada em 80 amostras a partir de três grupos de pacientes leucêmicos (LLA, LMA e LMC) antes de iniciar o tratamento, sete linhagens de células leucêmicas (697, RS4, 11, Nalm-6, Jurkat, REH, HL-60 e K562) e amostras de indivíduos não leucêmicos, as quais foram utilizadas como controle. Os resultados da análise demonstraram que o gene SIDT1 foi regulado negativamente nas sete linhagens de células leucêmicas humanas analisadas, principalmente para as linhagens de células 697, REH e HL-60 quando comparado com as amostras não leucêmicas. A linhagem celular K562 não apresentou qualquer expressão do gene SIDT1. Nas amostras clínicas analisadas também foi observado que o gene SIDT1 foi regulado negativamente principalmente na LMA. O estudo das alterações cromossômicas possibilitou incorporar a metodologia de diagnóstico molecular no Hospital de Base do Distrito Federal, como exame de rotina dos pacientes com suspeita de leucemia para auxiliar na avaliação dos pacientes. Estudos futuros são necessários para compreender a desregulação do gene SIDT1 ocasionada por diferentes tipos de alterações cromossômicas. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Leukemia is a heterogeneous group of hematologic malignancies resulting from multiple genetic alterations. The analysis of chromosomal abnormalities in leukemia patients has a direct application in the diagnosis, prognosis and treatment. Furthermore, the study of gene expression provides an important source for understanding the molecular consequences of genetic alterations in leukemia. The aims of this study were: (a) to identify the presence of chromosomal abnormalities in patients with a presumptive diagnosis of B ALL, AML and CML treated at Hospital de Base do Distrito Federal, enabling the incorporation of molecular diagnostic protocol; (b) to analyze the expression profile of SIDT1 gene in clinical samples of leukemia patients at diagnosis, leukemic cell lines and in non-leukemic. Therefore, the detection of chromosomal abnormalities was performed on 48 samples of suspected leukemia. The recurrent chromosomal alterations were detected: BCR-ABL1, p190 (1), E2A-PBX1 (1), PML-RAR_ (2) and BCR-ABL1, p210 (9). Quantitative analysis of SIDT1 gene expression was performed in 80 samples from three groups of leukemia patients (ALL, AML and CML) before starting treatment, seven lines of leukemic cells (697, RS4, 11, Nalm-6, Jurkat, HEK, HL-60 and K562) and non-leukemic samples from individuals, which were used as controls.. The analysis results showed that the SIDT1 gene is negatively regulated in the seven human leukemia cell lines examined, especially for cell lines 697, HL-60 and REH when compared to the non-leukemic samples. The K562 cell line showed no expression of the SIDT1 gene. SIDT1 gene has also been observed to be negatively regulated in the samples, especially in AML. The study of chromosomal abnormalities allowed to incorporate the molecular diagnostics methodology in the Hospital de Base do Distrito Federal, as a routine examination for patients with suspected leukemia to assist in the evaluation of patients. Future studies are needed to understand the dysregulation of SIDT1 gene caused by different types of chromosomal alterations.