Desenvolvimento de anticorpos monoclonais anti-fusion loop de ortoflavivírus a partir de uma biblioteca combinatória apresentada em fago (phage display) derivada de células B de memória

Abstract

Os ortoflavivírus, como dengue (DENV), zika (ZIKV) e febre amarela (YFV), constituem um importante problema de saúde pública, e ainda não há terapias antivirais específicas disponíveis. Diante desse cenário, anticorpos monoclonais humanos surgem como ferramentas promissoras para o desenvolvimento de terapias direcionadas e estratégias profiláticas. Este trabalho teve como objetivo a geração e aplicação de uma biblioteca apresentada em fago (phage display) derivada de células B de memória humanas para a seleção de anticorpos monoclonais contra o fusion loop (FL), uma região altamente conservada da proteína de envelope (E) dos ortoflavivírus que pode favorecer a recuperação de clones com amplo espectro de neutralização. A biblioteca foi construída no formato single-chain variable fragment (scFv), utilizando o vetor pComb3XSS, e apresentou diversidade estimada de 7,8 × 10⁶ transformantes. O repertório foi obtido a partir de células mononucleares de sangue periférico de indivíduos previamente expostos a DENV e/ou ZIKV, estimuladas in vitro para a expansão de células B de memória. O processo de seleção foi realizado com um peptídeo mimético do fusion loop do envelope viral, e os clones enriquecidos foram analisados por sequenciamento de nova geração (NGS) e convertidos para os formatos FvFc e IgG1, visando expressão em células Expi293. Dois anticorpos, FH2 e FH4, foram expressos e purificados com sucesso no formato IgG1. Ambos apresentaram ligação a ZIKV e aos quatro sorotipos de DENV, com diferentes perfis de afinidade, e demonstraram neutralização efetiva contra ZIKV e DENV-2. Esses resultados confirmam que o loop de fusão é um alvo funcional capaz de induzir anticorpos humanos de ampla reatividade e neutralização cruzada. O conjunto de dados obtido validam a abordagem experimental empregada, demonstrando que a combinação entre phage display e repertórios de memória humana é capaz de gerar anticorpos de alta afinidade e relevância funcional, e que a utilização do fusion loop como alvo favoreceu a seleção de anticorpos de ligação cruzada. Esses achados contribuem para o avanço do desenvolvimento de anticorpos terapêuticos contra ortoflavivírus.