Variabilidade na expressão de fatores de virulência e interação de isolados clínicos de Cryptococcus spp. com macrófagos

Abstract

Cryptococcus spp é um fungo patogênico que pode causar doença em humanos e outros mamíferos. As duas principais espécies patogênicas humanas desse gênero são C. neoformans e C. gattii. É considerado um patógeno oportunista, pois acomete na maioria das vezes pacientes com sistema imunológico comprometido, principalmente indivíduos com Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). Em ambas as espécies, a infecção se dá por meio da inalação de propágulos do agente disperso no ar como esporos ou leveduras desidratadas. Ao chegar no pulmão o fungo vai se instalar podendo ou não levar ao desenvolvimento da doença, ou pode se espalhar para outros sítios anatômicos apresentando tropismo pelo sistema nervoso central. Para se estabelecer no hospedeiro, Cryptococcus spp precisa escapar do sistema imunológico do hospedeiro. Para isso ele possui alguns mecanismos de virulência como a sua cápsula de polissacarídeo, a habilidade de crescer a 37°C, produção de melanina e enzimas como fosfolipases, urease e proteases. Esse fungo também é considerado um patógeno intracelular facultativo, uma vez que é capaz de parasitar e se reproduzir em macrófagos do hospedeiro, resistindo às atividades microbicidas dessas células. Os macrófagos são as principais células imunes na resposta a infecção por Cryptococcus spp. Na sua interação com essas células, pode ocorrer a destruição do fungo, a ruptura do macrófago e liberação dos fungos que se replicaram no seu interior, ou o fenômeno de exocitose não lítica. A partir da necessidade de se entender melhor a relação entre o patógeno e o hospedeiro, esse trabalho teve como objetivo avaliar a interação de isolados clínicos de Cryptococcus spp com os macrófagos bem, como avaliar a expressão in vitro de alguns de seus fatores de virulência. Nossos resultados demonstraram bastante variabilidade na expressão dos fatores de virulência estudados (atividade de urease e fosfolipase), bem como na capacidade de sobreviver à interação com macrófagos. Observamos uma correlação positiva entre o índice fagocítico e a capacidade do isolado em sobreviver à interação com macrófagos. Também observamos uma possível correlação entre a taxa de replicação do fungo e o processo de exocitose não-litica, no entanto não observamos uma correlação entre a sobrevivência dos pacientes e o processo de exocitose não-lítica. Conseguimos estabelecer um método mais quantitativo para avaliar a atividade de urease entre os isolados, em que podemos avaliar não só a capacidade do fungo de produzir essa enzima, mas também a cinética de produção dessa atividade. Observamos que a maior parte dos isolados clínicos apresentou uma cinética de produção dessa atividade significantemente diferente e mais lenta que a da linhagem padrão C. neoformans H99, e que em algumas linhagens a produção dessa atividade forambastante parecidas com de mutantes para urease. Nossos dados reforçam a necessidade de melhor caracterização de isolados clínicos, uma vez que a expressão de fatores de virulência e sua interação com o hospedeiro pode variar bastante em relação às linhagens padrão do fungo.