Caracterização química e biológica de peptídeos antimicrobianos presentes na secreção cutânea dos anuros Pithecopus rohdei e Lithobates palmipes

Abstract

O surgimento de microrganismos com resistência antimicrobiana tem crescido em todo o planeta. Uma das principais causas desse fenômeno é o uso indiscriminado dos antibióticos. Diante da ameaça da emergência de bactérias multirresistentes, a busca por novas formas terapêuticas tornou-se premente. A secreção cutânea de anuros tem se revelado uma fonte riquíssima de moléculas com propriedades farmacológicas, dentre elas os peptídeos antimicrobianos, que se destacam como uma alternativa relevante para o desenvolvimento de novas drogas antimicrobianas. No presente trabalho, foram coletados 11 espécimes do anuro Pithecopus rohdei, cuja secreção cutânea foi obtida por meio de estimulação elétrica de baixa intensidade e a secreção da pele foi coletada com água Milli-Q, liofilizada e armazenada a -20 ºC. Alíquotas de 15 mg da secreção cutânea liofilizada foram resuspendidas em 1 mL de TFA 0,1% em água Milli-Q. Após centrifugação, 200 µL do sobrenadante foram submetidos a RP-HPLC usando coluna C18, resultando na eluição de 20 frações cromatográficas. Tais frações foram manualmente coletadas, secas a vácuo e testadas para verificar sua atividade antimicrobiana, com diversas frações mostrando-se ativas contra bactérias patogênicas. As frações com atividade antimicrobiana foram analisadas por espectrometria de massas. Dentre elas, 4 frações (10, 14, 15 e 19) exibiram componentes com massas moleculares inéditas: 3061,567 Da; 2848,367 Da; 2849,389 Da e 1970.22 Da, respectivamente. Essas frações mostraram-se homogêneas e foram submetidas ao sequenciamento químico por degradação de Edman e, em seguida, a análises de similaridade permitindo identificar uma nova filoseptina e três novas dermaseptinas presentes nessa secreção cutânea. Também foi caracterizado no presente estudo uma nova ranateurina isolada da secreção cutânea do anuro Lithobates palmipes. Este estudo teve o objetivo de avançar na caracterização química e biológica do arsenal de peptídeos antimicrobianos presentes na secreção da pele dos anuros P. rohdei e L. palmipes.