Papel do ergosterol na ativação de macrófagos infectados in vitro com o Cryptococcus neoformans

Abstract

O ergosterol é um componente da membrana fúngica que auxilia na proteção contra estresses oxidativos e resistência a estresses ambientais, além de ser um alvo importante na terapia antifúngica. A deleção de genes da via do ergosterol demonstrou interferência na sobrevivência e na virulência de diversos fungos. A fim de entender melhor como a ausência do Ergosterol pode interferir na sobrevivência do C. neoformans e na ativação da resposta imunológica, avaliamos a termosusceptibilidade da linhagem nocaute, e a resposta imunológica de macrófagos provenientes da medula óssea de camundongos (BMDM) ao interagir com o mutante. Também utilizamos as vesículas extracelulares (EVs) lisadas e intactas do mutante e do selvagem para avaliar a ativação da resposta imunológica. O mutante Δerg6 possui em sua membrana outros lipídeos como Lanosterol e Esqualeno, então avaliamos também se esses lipídeos podem ativar a resposta imunológica utilizando nanopartículas com os lipídeos incorporados durante a interação com BMDM. Os resultados demonstraram que o mutante Δerg6 sobrevive a 37°C, porém não é capaz de proliferar nessa temperatura. Também mostramos que o mutante é capaz de estimular a resposta imunológica com a dosagem das citocinas IL-1b, TNF-a e IL-6 e de Óxido Nítrico, mas em menores níveis que a cepa selvagem. Também encontramos resultados parecidos na interação com as EVs intactas do mutante e do selvagem com BMDM. Entretanto, as EVs produzidas pelo mutante Δerg6 quando lisadas, estimulam maior produção de citocinas do que as EVs lisadas da linha selvagem, sugerindo a presença de diferentes componentes nas EVs dos mutantes. Demonstramos que as nanopartículas com os lipídeos presentes na membrana causam a morte celular dos BMDM, porém com baixa capacidade de induzir a produção das citocinas avaliadas neste trabalho. Dessa forma, conseguimos demonstrar que o mutante Δerg6 permanece viável à temperatura corporal humana, mas sem capacidade de proliferação, e é capaz de produzir EVs que são capazes de estimular a ativação da resposta imune em BMDM.