Influência de molécula quórum sensing OdDHL produzida por pseudomonas aeruginosa sobre as propriedades funcionais das células-tronco mesenquimais

Abstract

A bactéria Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista, cuja virulência e mecanismo de interação com o hospedeiro são controlados por moléculas de sinalização dependentes da densidade celular, denominadas sensoriamento quórum sensing (QS). Este patógeno apresenta dois tipos de moléculas de sinalização QS, as lactonas N-Acil- homoserina e o sinal 2-heptil-3-hidroxi-4-quinolona. As células-tronco mesenquimais (CTMs) têm sido exploradas para tratar uma variedade de condições clínicas, especialmente distúrbios imunológicos. Nesse sentido,vários estudos demonstraram que o priming das CTMs com INF-γ aumenta a propriedade imunomoduladora dessas células.No presente estudo,investigamos a influência do QS N- (3-oxododecanoil) -L-homoserina (OdDHL) sobre as propriedades biológicas de CTMs submetidas ou não ao priming com INF-γ. Por uso do teste MTT, demonstramos que, após 24h de cultura celular, o OdDHL (10 e 50µM) compromete a viabilidade das CTMs, independente do priming com INF-γ. Através de ensaio de apoptose celular com Anexina/PI, por Citometria de Fluxo, observamos que o OdDHL (10 e 50µM) induz apoptoseem CTMs e que esse efeito parece ser mais pronunciado em CTMs licenciadas com INF-γ. Em linha, as CTMs submetidas ao tratamento com 50µM OdDHL apresentaram maior liberação da enzima de lactato desidrogenase (LDH) no meio extracelular, efeito que foi realçado pelo priming dessas células com INF-γ. Curiosamente, em concentrações não tóxicas, de 0,5 e 1µM, observamos que o OdDHL realçou o potencial migratório das CTMs, principalmente, nas células não licenciadas. Entretanto, nessas mesmas doses, notamos que OdDHL diminuiu o potencial imunossupressivo das CTMs. Demonstramos ainda, funcionalmente, que e as CTMs inibem de forma direta o crescimento de Pseudomonas aeruginosa. Como pode ser visto, demonstramos nesse estudo que o licenciamento com INF-γ aumenta o potencial imunossupressivo das CTMs, mas não protege essas células dos efeitos deletérios promovido pela elevada concetração de OdDHL. Mais importante, o licenciamento das CTMs com INF-γ parece comprometer de modo significativo o efeito antimicrobiano das CTMs quando essas células são desafiadas a controlar o crescimento da bactéria Pseudomonas aeruginosa. Apesar do nosso estudo ser desenvolvido in vitro, os achados obtidos servem de alerta para os efeitos de moléculas QS sobre as propriedades das CTMs, indicando que quando em baixas doses essas moléculas podem até potencializar propriedades importantes das CTMs, mas em doses mais elevadas elas comprometem a viabilidade dessas células, independente do licenciamento com INF-γ.