Quantificação do dna de Mycobacterium Leprae em diferentes camadas da pele: estudo sobre eliminação transepidérmica, progressão para cura e transmissão

Abstract

O progresso das técnicas moleculares foi primordial para o diagnóstico prévio da hanseníase. Porém, os atuais estudos na área ainda não conseguiram esclarecer o desempenho dessas técnicas na prática clínica. O presente projeto teve como objetivo principal testar na prática clínica a acurácia, sensibilidade e especificidade de um novo par de iniciadores desenvolvido para o alvo do elemento repetitivo (RLEP) do Mycobacterium leprae. Além disso, como objetivo secundário, buscou-se identificar o potencial de transmissão de pacientes com hanseníase multibacilar e paucibacilar. Desta forma, foi realizado um estudo de coorte transversal de acurácia diagnósticacom um total de cem pacientes com quadro clínico compatível com hanseníase. Nesse estudo, utilizou-se a Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real (qPCR) para quantificar o M. leprae nas diferentes camadas da pele e em swab nasal. As amostras de pele foram divididas em quatro camadas: epiderme, derme superior, derme inferior e hipoderme. Os resultados da quantificação do bacilo nas amostras de swabs nasais foram relacionados ao número de contatos intradomiciliares. Como critério de positividade para a reação da qPCR, foram estabelecidos três pontos de corte: 1 - qualquer DNA de bacilo quantificável, 2 - quantificação acima ou igual a 0,1 bacilo, 3 - quantificação acima ou igual a 1 bacilo. A validação da quantificação in vitroda reação resultou em um limite de quantificação de 0,03 bacilos. A melhor sensibilidade foi observada na derme superior de acordo com o primeiro ponto de corte estabelecido [sensibilidade = 59,26% (IC 95% = 45,97 – 71,32)]. Na epiderme, o terceiro ponto de corte resultou em 100% de especificidade (IC 95% = 92,29 - 100). A melhor acurácia foi encontrada na hipoderme no primeiro ponto de corte [acurácia = 68,09% (95% CI = 58,11 – 76,64)]. Para as amostras de swab, a melhor sensibilidade foi de 20,83% (95% CI = 11,73 – 34,26), e foi alcançada no primeiro ponto de corte. Nos três pontos de corte testados, foi obtida 100% de especificidade nas amostras de swab. O número de bacilos encontrados nos swabs nasais não teve relação significativa com o número de contatos domiciliares também diagnosticados com hanseníase. Pacientes paucibacilares testaram positivo apenas para fragmentos de bacilo em swabs nasais, mas não para o bacilo inteiro. Este fato demonstra que pacientes paucibacilares podem não ser uma fonte relevante de transmissão da doença. Concluiu-se que diferentes tipos de amostras de pele têm pouca influência na acurácia do teste de qPCR. Porém, em contraste com esse resultado, diferentes pontos de corte podem influenciar na acurácia, sensibilidade e especificidade do teste de qPCR.