Extração, caracterização e avaliação do potencial de regeneração celular de extrato bruto de semente de Bixa Orellana L.

Abstract

Úlcera de Pé Diabético (UPD) representa um elevado fator de risco para amputação e está entre as principais causas de hospitalização em diabéticos, culminando em alto custo para o Sistema Único de Saúde (SUS). Assim, esta moléstia representa um grave problema de saúde público,suscitando a necessidade de investimento público para o desenvolvimento de pesquisas voltadas para a busca de estratégias terapêuticas curativas. Nosso grupo desenvolveu um sistema terapêutico para neoformação tecidual o qual foi denominado Rapha® plus, que consiste no uso concomitante de fototerapia e curativo baseado em biomembrana de látex natural (BLN), oriundo de Hevea brasiliensis, contendo lipossomas com curcumina (Curcuma longa). Os resultados foram muito promissores, visto que a cicatrização com este sistema foi cerca de 70% superior à do tratamento convencional adotado como padrão-ouro pelo SUS. Todavia, este curativo não apresentou efeito antimicrobiano. Por isso, a associação de bioativoscom atividade antimicrobiana poderia ser útil e favorecer um efeito sinérgico na promoção da cicatrização, dado que infecções bacterianas estão relacionadas com o agravamento da ferida e o aumento das chances de amputações. Neste trabalho, propõe-se a extração, caracterização e avaliação da biocompatibilidade, potencial antioxidante e para regeneração celular do extrato de semente de urucum (Bixa orellana). Extrato de urucum apresenta bioativos com propriedades antioxidante e antimicrobiana. Neste estudo, será utilizado extrato bruto de sementes de urucum (Bixa orellana L.), obtidos de forma comercial por meio de doação pela empresa New Max® ou por meio de extração química por solvente. As sementes de urucum foram obtidas de comunidade extrativista quilombola. A extração dos compostos das sementes, por meio de solvente, foi realizada com os solventes de Hexano, Acetato de Etila e Etanol nas temperaturas de 50°C e 130°C para definição do protocolo de extração mais eficiente. Para avaliação da composição química do extrato e validação do método de extração, realizaram-seanálises por meio de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e Espectrofotometria. Com base nos resultados, os métodos de extração de biocompostos de interesse, como os carotenoides bixina e norbixina, foram eficientes. O extrato de urucum obtido por meio da extração com etanol a 50°C apresentou o maior rendimento (7,69 g) e teor de extrato (57,5%), dado que o tempo de retenção de bixina foi mais próximo ao padrão comercial deste biocomposto. Por isso, esse extrato foi utilizado para realização das análises de biocompatibilidade in vitro de queratinócitos e fibroblastos, por meio dos ensaios de brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) e de regeneração celular por meio de“Scratch assay”. Além disso, avaliou-se o potencial antioxidante do extrato. Foram testadas doses de 2,5 a 80 µg/mL e observou-se viabilidade celular acima de 80%, exceto na dose de 80 µg/mL. Com isso, foi selecionada a dose de 10 µg/mL para realização do ensaio de migração celular. Para avaliação da atividade antioxidante do extrato, utilizou-se uma técnica de ressonância magnética eletrônica, mas não foi possível detectar atividade antioxidante na dose de 1 mg/mL. Também foi realizado outro método para avaliação de sequestro de radicais livres (DPPH) e notou-se cerca de 50% de atividade antioxidante em comparação com o controle (ácido ascórbico) após 30 minutos de exposição a 10 e 100 µg/ml de extrato. Concluiu-se queo método de extração de biocompostos do extrato de urucum utilizando-se o solvente etanol a 50ºC foi o método com maior rendimento. Além disso, pôde-se concluir que o extrato obtido por esse método é biocompatível nas doses de até 80 µg/ml e que apresenta significativaatividade antioxidante e potencial para regeneração tecidual. Portanto, o extrato de urucum apresenta elevado potencial para associação a curativos, dado que a propriedade antioxidante é muito útil para o processo de cicatrização.