Comparação de métodos de criopreservação em tecido ovariano de gatas domésticas : vitrificação versus congelamento lento

Abstract

O presente estudo testou duas técnicas de criopreservação (vitrificação e congelamento lento) com combinações diferentes de crioprotetores. Para realizar o estudo, foram utilizados os ovários de 10 gatas submetidas a ovariohisterectomia eletiva na clínica veterinária Casa do Gato, localizada em Brasília, DF. No total, foram coletados 20 ovários, cada um dos quais foram divididos em oito fragmentos de 3mm³. Dois fragmentos de cada ovário foram imediatamente fixados para o controle fresco, enquanto os demais fragmentos (dois para cada grupo) foram aleatoriamente destinados aos tratamentos de congelamento lento ou vitrificação, em soluções que consistiam em: No grupo V1, a solução de equilíbrio (SE) continha 10% de DMSO, 10% de EG e trealose 0,1M, enquanto a solução de vitrificação (SV) tinha 20% de DMSO, 20% de EG e trealose 0,1M. Já no grupo V2, a solução de equilíbrio era composta por 10% de DMSO, 10% de EG e sacarose 0,1M, e a solução de vitrificação (SV) possuía 20% de DMSO, 20% de EG e sacarose 0,1M. No grupo V3, a solução de equilíbrio apresentava 20% de DMSO e trealose 0,1M, enquanto a solução de vitrificação (SV) continha 40% de DMSO e trealose 0,1M. Em contrapartida, nos grupos de congelamento lento, o CL1 tinha uma solução com 1M de DMSO, 1M de EG, 10% de SFB e 0,4% de trealose. O CL2 utilizou uma solução com 1,5M de DMSO, 10% de SFB e 0,4% de sacarose, enquanto o CL3 adotou uma solução com 1,5M de DMSO, 10% de SFB e 0,4% de trealose. Todas as amostras foram armazenadas em nitrogênio líquido durante pelo menos sete dias e os fragmentos foram descongelados/ desvitrificados e fixados após esse período. A análise histológica foi realizada para quantificar e classificar os folículos, os testes imuno-histoquímicos para avaliar a presença de folículos proliferativos. Além disso, foi realizada uma análise ultra-estrutural por meio de microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados indicaram que o grupo V1 apresentou os melhores resultados em relação à preservação da reserva folicular primordial e de folículos em crescimento, destacando-se como o mais eficaz na sobrevivência folicular. A análise de microscopia eletrônica dos folículos do grupo V1 mostrou aspectos positivos, como núcleos celulares normais, nucléolos bem estruturados e mitocôndrias com distribuição homogênea nas células da granulosa. No entanto, um achado indesejável foi observado, representado pelo descolamento do ovócito em relação às células da granulosa. Apesar dos resultados promissores, mas estudos futuros são necessários para maior comprovação da eficácia dos protocolos apresentados.