Estudo do envolvimento da via ERK1/2 sobre a resposta adipogênica e anti-inflamatória de agonistas de PPARγ em macrófagos e adipócitos

Abstract

Introdução: O tecido adiposo produz vários mediadores inflamatórios implicados na fisiopatologia da obesidade. A inflamação associada à obesidade é caracterizada pela produção anormal mediadores inflamatórios, assim como pela infiltração por macrófagos. A obesidade acarreta o aumento da incidência de comorbidades como o diabetes mellitus (DM2). O uso de tiazolidinedionas (TZDs) no tratamento do DM2 está associada a diversos efeitos adversos. Estudos anteriores mostraram que GQ-16 apresentou atividade agonista parcial e específica em PPARγ, (TZDs) e efeitos semelhantes às TZDs na redução da glicemia e com menor efeito9 adipogênico. Muitos dos efeitos dos agonistas de PPARγ são explicados pela alteração da expressão gênica. Contudo, estudos demonstram que os agonistas podem mediar efeitos rápidos e que envolvem uma série de eventos intracelulares. No entanto, ainda não foi explorado se estes mecanismos não-genômicos de agonistas PPARγ poderiam explicar os efeitos benéficos do agonista parcial do PPARγ GQ-16. Objetivo: Este estudo buscou analisar os efeitos de agonistas total e parcial de PPARγ sobre a ativação da via ERK1/2 e o envolvimento dessa via na expressão de genes inflamatórios em cultura de macrófagos e inflamatórios (Tnfα e Il6) e adipogênicos (Glut4, Adpn, Ap2) em cultura de pré-adipócitos. Métodos: Macrófagos RAW 264.7 foram cultivados na presença de veículo (DMSO, 0,001%), rosiglitazona (RSG) (10 -5 M), GQ-16 (10 -5 M) e na presença ou ausência de estímulo inflamatório LPS (100 ng/mL) ou com a inibidor da MEK 1/2 (U0126 10μM). Pré-adipócitos 3T3-L1 foram cultivados até sua confluência. Após 2 dias foram tratados com coquetel indutor da diferenciação adpogênica por mais dois dias, e em seguida, foram tratados com insulina e os diferentes tratamentos por mais 2 dias: veículo (DMSO, 0,001%), RSG (10 -5 M), GQ-16 (10 -5 M) na presença ou ausência de inibidor da MEK 1/2. A expressão relativa do RNA mensageiro dos genes inflamatórios e adipogênicos foi analisada por PCR quantitativa em tempo real (RT-PCRq). A fosforilação da ERK1/2 foi avaliada por ensaio de Western blot. Resultados: Em cultura de pré-adipócitos no início da diferenciação ambos agonistas de PPARγ não alteraram a fosforilação da ERK1/2. Foi possível observar que a RSG apresentou efeito adipogênico maior que o GQ-16, e que pelo menos parte desse efeito se deve a ativação da via da ERK. Quando analisada a expressão relativa do RNAm do gene da interleucina 6 (Il6), ambos os agonistas diminuíram a sua expressão. Em cultura de macrófagos, a fosforilação da ERK1/2 estimulada por LPS foi diminuída pelo tratamentos com os agonistas de PPARγ. O efeito do LPS na expressão relativa do RNAm de genes inflamatórios foi diminuido quando associado ao agonista total do receptor PPARγ no entanto, a associação com agonista parcial não alterou tal efeito. Conclusão: Pode-se sugerir que o efeito adipogênico maior da RSG em relação ao GQ-16 deve-se em parte ao envolvimento da via da ERK. Ainda, ambos agonistas apresentaram efeito anti-inflamatório, embora o agonista total apresentou maior efeito quando comparado ao agonista parcial. Com estes resultados, este projeto contribuiu para a elucidação do mecanismo de ação do GQ-16, um novo modulador seletivo de PPARγ.