Uso do FSH recombinante humano na produção in vitro de embriões bovinos

Abstract

A produção in vitro de embriões (PIVE) de bovinos está em constante crescimento, e o desenvolvimento de novos protocolos é importante para a melhoria dos índices de produção, o que pode permitir o escalonamento da técnica. Dentre as etapas da PIVE, a maturação in vitro (MIV) é considerada essencial, pois ocorrem alterações no ovócito que permitem que a fecundação ocorra com sucesso e inicia-se o processo de desenvolvimento embrionário. In vitro, o FSH é necessário nas primeiras horas da MIV e, convencionalmente, os meios de maturação são suplementados com FSH de hipófise suína. Entretanto, esse extrato não possui uma padronização entre as partidas, possui contaminação de outros hormônios, como o LH, e encontra-se, atualmente, excasso no mercado. Em 1988 foi produzido o primeiro FSH recombinante humano. Através dessa tecnologia é possível produzir a molécula em grande escala, com alta pureza e sem variabilidade na composição. Existem algumas formulações de rhFSH disponíveis no mercado, como as folitropinas alfa, beta e delta. A folitropina alfa é utilizada na rotina clínica na reprodução humana desde 1995. Atualmente, essa molécula vem despertando interesse para uso na área animal, devido a sua padronização entre doses, pureza e meia vida mais prolongada. Nosso estudo avaliou o uso de FSH suíno (pFSH) ou folitropina-alfa (rhFSH), durante a maturação in vitro (MIV) de complexos cumulusoócitos (COC) recuperados de bovinos Nelore (Bos taurus indicus). Foram realizados quatro experimentos, todos usando CCO grau I (n = 11.245) submetidos a MIV em TCM199 sem FSH (-FSH) ou suplementados com 0,5 μg/mL de pFSH (Folltropin-V, Exp. 1 a 4) ou 0,1 UI rhFSH (Gonal-F, Exp. 2, 3 e 4). Foram feitas avaliações da expansão do cumulus, produção de blastocisto, criotolerância, contagem de células e taxa de prenhez. A expansão do cumulus foi maior (P<0,0001) na presença de pFSH, independentemente da concentração de SFB. FSH e o SFB aumentaram as taxas de clivagem e blastocisto (P<0,05), mas nenhuma interação entre eles foi observada (P>0,05). No Exp. 2, CCO (n=2.791) foram maturados na ausência de FSH (-FSH) ou com pFSH ou rhFSH, e foram submetidos à PIVE. Blastocistos foram avaliados para eclosão como frescos ou após vitrificação e desvitrificação (ou reaquecimento). A expansão do cumulus e as taxas de blastocisto foram maiores (P<0,05) nos grupos tratados com FSH (pFSH e rhFSH) do que sem FSH (-FSH). No entanto, não houve efeito do tratamento (P>0,05) nas taxas de eclosão de blastocistos frescos ou vitrificados. No Exp. 3, CCO (n=720) foram maturados nos grupos -FSH, pFSH ou rhFSH, e os blastocistos expandidos produzidos foram corados com Hoechst 33342 e iodeto de propídio. Blastocistos do grupo rhFSH apresentaram mais células no trofoblasto (P=0,0002), mas não no MCI (P=0,3231), quando comparados aos grupos pFSH e -FSH. No Exp. 4, usamos o mesmo desenho experimental do Exp. 2 mas em uma rotina comercial de PIVE, que incluiu o uso de CCO recuperado por OPU e sêmen sexado de macho, e a transferência de parte dos blastocistos produzidos. Tanto o pFSH quanto o rhFSH aumentaram as taxas de clivagem (P=0,0035) e de blastocistos (P=0,0102), mas não a taxa de prenhezez (P=0,1080), em comparação com -FSH. Em resumo, a folitropina-alfa é uma alternativa ao pFSH como suplemento para MIV de CCO bovino.