Interação Trypanosoma cruzi-hospedeiro : interferência póstranscricional na expressão da subunidade β1i do imunoproteassoma humano

Abstract

A Doença de Chagas é provocada pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi), é considerada endêmica em 21 países da América Latina e, de acordo com a OMS, acomete entre 6 e 7 milhões de pessoas ao redor do mundo. Estudos demonstram a capacidade do parasita em evadir o sistema imune de seu hospedeiro, se replicando e mantendo a infecção por anos. Em alguns destes estudos, foi demonstrado que o parasita interfere em nível pós-transcricional na expressão de proteínas componentes da via de apresentação MHC classe I, especificamente as subunidades induzíveis do imunoproteassoma (β1i, β2i e β5i), a subunidade PA28α, a proteína TAP e o MHC I. Um estudo especificamente, apresentou a hipótese de esta interferência ocorrer nas regiões 5’ e 3’ UTR dos mRNAs destas proteínas. Com base nisto, o presente trabalho se propôs a validar esta teoria utilizando como modelo a subunidade β1i do imunoproteassoma. Para este fim, essas duas regiões foram amplificadas e clonadas flanqueando o gene repórter EGFP em um vetor de expressão para células eucarióticas. Com este vetor (denominado pUTRs/β1i/EGPF) e um vetor de controle (pEGFP) foram realizados testes onde células HeLa passaram por um processo de transfecção transiente com estes vetores antes ou após exposição destas células ao parasita T. cruzi cepa Y. Os resultados obtidos demonstraram que há uma supressão na expressão do gene repórter do vetor pUTRs/β1i/EGPF apenas quando as células foram transfectadas 20 horas antes da exposição ao parasita, indicando que as regiões não traduzidas do mRNA são alvo de ação do parasita, mas apenas nas primeiras horas de interação do parasita com a célula hospedeira.