Criopreservação e transplante de ovário em camundongos : atividade mitocondrial ovariana e efeito da eritropoietina sobre a sobrevivência folicular

Abstract

Os agentes quimioterápicos e a irradiação utilizados em tratamentos agressivos de combate ao câncer podem levar à insuficiência ovariana prematura. Uma técnica promissora para preservar a fertilidade feminina e restaurar a função endócrina ovariana é a criopreservação do tecido ovariano, antes do tratamento oncológico, seguida de transplante, após a remissiva total da doença. No entanto, o estresse decorrente dos processos de criopreservação e descongelamento pode levar a alterações e/ou danos à estrutura e funcionalidade mitocondrial. Além disso, grande parte dos folículos são perdidos ao longo do intervalo isquêmico que ocorre entre o transplante e a neovascularização tecidual. Nesse cenário, o objetivo deste estudo foi caracterizar a atividade mitocondrial em tecido ovariano de camundongos submetidos à criopreservação de congelamento lento, seguida de transplante e, também, avaliar o efeito da administração de eritropoietina na sobrevivência folicular. Na fase I, amostras de tecido ovariano de camundongos (n=20) (Swiss nu / nu) foram submetidas a quatro condições diferentes: Fresco, Transplante Fresco, Criopreservado e Transplante Criopreservado. O tecido ovariano foi criopreservado por congelamento lento e armazenado em nitrogênio líquido (-196 °C) por 7 dias. Imediatamente após o descongelamento, o tecido ovariano foi transplantado e recuperado após 7 dias. As amostras foram submetidas à análise histológica e as taxas de consumo de oxigênio determinadas por meio de Respirometria de Alta Resolução. Para avaliação do efeito da administração de eritropoietina (EPO), na fase II, os camundongos foram divididos em três grupos: Grupo Controle (n=10), Grupo EPO (n=10) e Grupo Salina (n=10). Cada fêmea do Grupo Controle recebeu o transplante de dois hemiovários criopreservados, na região subcutânea dorsal. As fêmeas do Grupo EPO receberam 500 UI/kg de EPO, via intraperitoneal, administrada em duas doses de 250 UI/Kg cada (12/12 horas, BID), durante cinco dias consecutivos, dois dias antes da ovariohisterectomia (OSH), no dia da OSH e dois dias após a OSH. As fêmeas do Grupo Salina receberam solução fisiológica 0,9% estéril, via intraperitoneal (12/12 horas, BID), no mesmo esquema e no mesmo volume total da EPO recebida pelo Grupo EPO. A retirada dos fragmentos foi realizada aos 7 e 14 dias após o transplante. Os resultados da oximetria demonstraram um consumo de oxigênio relevante em todas as amostras analisadas, responsivo a todos os reagentes utilizados no protocolo SUIT, embora tenha ocorrido uma redução significativa da função mitocondrial em relação ao tecido ovariano fresco. Essa diminuição na atividade mitocondrial se deu conforme o tipo de tratamento a qual o tecido ovariano foi submetido (criopreservação e/ou transplante). O efeito da criopreservação no metabolismo mitocondrial foi menos intenso do que o efeito do transplante, uma vez que o transplante afetou todos os estados mitocondriais. Na fase II, foi demonstrado que a eritropoietina contribuiu para um maior desenvolvimento folicular no D7 pós-transplante, mas que seu efeito não foi prolongado até o D14. Além disso, seu potencial de ação é maior quando administrada após o recebimento dos enxertos. Apesar da diminuição na viabilidade folicular e na atividade mitocondrial, a técnica de criopreservação seguida de transplante de tecido ovariano mostrou-se viável, tanto morfológica quanto metabolicamente, para tentativas de restauração da função ovariana.