Características ultraestruturais de ovócitos ovinos durante a maturação in vitro

Abstract

O objetivo deste trabalho foi descrever e avaliar, através da análise de aspectos ultraestruturais, o processo de maturação in vitro (MIV) de ovócitos ovinos por um período de 24 horas após a inserção de ovócitos imaturos no meio de maturação. Para isso, foram coletados ovários de abatedouro, sendo os folículos aspirados no laboratório. Os complexos cumulus oophorus (CCO) selecionados foram divididos em grupos e transferidos para o meio de maturação onde permaneceram por 6, 12, 18 e 24 horas após o início do processo, exceto o tratamento 0 hora. Após a retirada das estruturas nos diferentes tempos de maturação, essas foram processadas para a microscopia eletrônica de transmissão. Foi observado no tratamento 0 hora que os ovócitos possuíam características compatíveis com estruturas imaturas e após 6 horas de MIV ocorria a migração de mitocôndrias e lipídeos para a periferia citoplasmática e início de expansão das células do cumulus. Tais alterações relacionam-se ao processo de aumento de atividade metabólica ovocitária e início do processo de maturação que levará o ovócito até o estágio de metáfase II. Entre 12 e 18 horas de MIV foram observados rearranjos citoplasmáticos de organelas, tais como o alinhamento e aumento dos grânulos da cortical associados à membrana plasmática, que permitiram inferir sobre o processo de maturação nuclear, sugerindo que, nessa espécie, 18 horas de MIV seriam suficientes para o ovócito atingir sua maturação citoplasmática e nuclear e ser fertilizado. Foi observado também a presença de mitocôndrias do tipo hooded em alguns momentos da maturação. Tais estruturas são comumente encontradas em ovócitos de outras espécies e podem estar relacionadas há um aumento da atividade metabólica mitocondrial durante o período de migração de organelas. Após 24 horas de MIV, os ovócitos avaliados apresentavam características de degeneração o que pode estar ligado ao envelhecimento desta célula devido à sua permanência por mais 6 horas no meio MIV depois da aquisição de competência para a fertilização in vitro (FIV). Este trabalho permitiu a avaliação de aspectos ultraestruturais da MIV em ovinos, bem como forneceu conhecimentos a respeito da maturação nuclear. Entretanto, mais estudos devem ser realizados para aprimorar essa importante biotécnica nessa espécie. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT

The aim of this study was describe and evaluate, by analysis of ultrastructural aspects, the in vitro maturation (IVM) process of the sheep oocytes during 24 hours after insertion of immature oocytes in maturation medium. For this, ovaries were collected from slaughterhouse and its follicles were aspirated on laboratory. The selected cumulus oocyte complex (COC) were divided into groups and transferred to the maturation medium where they were maintained for 6, 12, 18 and 24 hours after the beginning of process, except the 0 hour treatment. The structures were removed after different maturation times and processed to transmission electron microscopy. In 0 hour treatment the oocytes had compatible characteristics with immature structures and, after 6 hours of IVM, there was migration of mitochondrias and lipids to the cytoplasm periphery and the onset of cumulus cells expansion. These alterations were compatible with increasing metabolic activity on oocyte and the onset of maturation process that enable the structure to reach metaphase II. Between 12 and 18 hours of IVM, were observed cytoplasmic rearrangements of organelles, like aligning and increasing of cortical granules associated with plasmatic membrane, that were related to the process of nuclear maturation, suggesting that, in this specie, 18 hours of IVM were enough to the oocyte reach nuclear and cytoplasmic maturation and be fertilized. The presence of hooded mitochondrias in some times of maturation was observed. These structures were commonly found on other species oocytes and could be related to increase of mitochondrial activity metabolic during organelles migration. After 24 hours of IVM, the oocytes had characteristics of degeneration that can be related to cellular aging because of the persistence on the maturation medium after acquisition competence to in vitro fertilization (IVF). This work enabled the evaluation of the ultrastructural aspects of sheep IVM and provide knowledge about the nuclear maturation. However, more studies must be performed to refine this important biotechnique in sheeps.