Identificação e isolamento dos compostos bioativos da secreção de Rhinella mirandaribeiroi (Bufonidae)

Abstract

A secreção cutânea dos anfíbios apresenta um mecanismo de defesa inata, sendo constituída por inúmeros compostos bioativos de várias classes moleculares e o papel dessa defesa passiva é, principalmente, contra microrganismos, predadores e injúrias bioquímicas. A secreção cutânea da família Bufonidae é rica em compostos de baixa massa molecular como aminas biogênicas, esteroides e alcaloides, mas também podem ser encontrados peptídeos e proteínas, e muitos possuem importantes funções farmacológicas. O Brasil é o território com a maior diversidade de anfíbios do mundo, uma dessas espécies é a Rhinella mirandaribeiroi (Cururuzinho), um anuro da família Bufonidae, ainda é pouco explorada como alvo de estudos bioquímicos. Portanto, este trabalho teve como objetivo analisar a secreção cutânea de Rhinella mirandaribeiroi, para a identificação e caracterização de compostos bioativos. Primeiramente foram analisadas as atividades bioativas do extrato aquoso da secreção bruta, onde se obteve resultado de parcial inibição no crescimento de células bacterianas de Escherichia coli (39%) e células fúngicas de Candida albicans (41%); IC50 igual a 3,2, 4,6 e 5,6 mg/mL para as linhagens B16F10, HeLa e MCF-7, respectivamente; parcial atividade fosfolipásica e antioxidante. Posteriormente a secreção foi fracionada por Cromatografia Liquida de Alta Performance (HPLC) e obteve-se 24 frações. Foram realizados os ensaios antibacteriano e antifúngico para todas as frações. Considerando uma inibição de crescimento aproximadamente maior que 95%,

obtivemos 4 frações que inibiram o crescimento de células bacterianas e 11 frações que inibiram células fúngicas. Foram purificados e caracterizados 3 compostos de principal interesse. O composto chamado de Fração RRM-22.6 observamos se tratar de uma fosfolipase do tipo A2 que possui aproximadamente 14 KDa e inibiu parcialmente células fúngicas de C.albicans em 61%. A Fração RRM-12.5 sugerimos ser um esteroide bufadienolídeo de 415 m/z, possivelmente uma bufotalinina ou 19-oxo-desacetylcinobufagina, que inibiu parcialmente o crescimento de células bacterianas (E. coli e S. aureus), inibiu em 80% o crescimento de células fúngicas (C. albicans), além de ter atividade antioxidante. A Fração RRM-5.1 sugerimos se tratar de uma amina biogênica, especificamente uma indolquilamina de 203 m/z, a dehidrobufotenina, que teve alta atividade antioxidante nos ensaios de redução do ferricianeto, FRAP e MTT; por citometria de fluxo, manteve as células de MCF-7 viáveis e teve ação protetora para as células contra a atividade apoptótica de H2O2; teve atividade de inibição de crescimento em quase 100% contra células bacterianas de Staphylococcus aureus e 80% contra Escherichia coli.