Produção e otimização de lacases e Peroxidases obtidas de Diaporthe spp. isolados com endofíticos de Solanum falciforme Farruggia

Abstract

Os fungos endofíticos são microrganismos que colonizam o interior de diversas espécies vegetais nos seus espaços intercelulares ou dentro de células, mantendo um relacionamento simbiótico com eles. Seu potencial biotecnológico como produtores enzimáticos vêm despertando cada vez mais interesse. Neste trabalho, dois fungos endofíticos foram isolados da planta Solanum falciforme Farruggia, nativa do Cerrado Brasileiro. Os isolados, “P1” e “P2” foram submetidos à identificação molecular utilizando-se a região ITS para estabelecer a relação filogenética deles: P1 foi agrupado com Diaporthe stictica e P2 com Diaporthe maritima. Eles foram identificados como pertencentes ao gênero Diaporthe, relatado com um dos gêneros de fungo endofítico mais frequentemente isolados. Os dois isolados fúngicos foram analisados quanto à sua capacidade de produção de enzimas oxidativas: lacases e peroxidases totais. Para estabelecer o melhor dia de produção dessas enzimas o perfil de liberação enzimático das enzimas de interesse para cada isolado foi analisado por 30 dias. Para o “P1” foi selecionado o 11o dia (38,63 Ulacase/mL; 46,77 Uperoxidases totais/mL) e para o “P2” o 10o dia (P2: 41,21 Ulacase/mL; 13,55 Uperoxidases totais/mL). Para cada isolado foi realizado um planejamento fatorial 23 com um ponto central em triplicata para otimização da produção enzimática pelos fungos, testando-se os fatores pH inicial do meio nos níveis 4 e 8, a quantidade de peptona, como fonte de nitrogênio, nos níveis 0,0g e 1,0g e bagaço de cana, como fonte de carbono, nos níveis 0,25g e 0,75g; o ponto central combinou o pH inicial, peptona e de bagaço de cana nos níveis 6, 1,0g e 0,50g, respectivamente. Nenhum modelo estabelecido pelos planejamentos fatoriais obteve significância estatística de acordo com os níveis em que esses fatores foram testados (nível de confiança: 95%), apenas os fatores pH inicial, peptona e a interação entre eles foram considerados significativos (p<0,05) para a produção de lacase para o isolado “P1”. De modo geral, a produção enzimática aumentou quando o pH inicial estava no nível mais baixo e a quantidade de peptona no nível mais alto. Esse trabalho gerou dados relevantes sobre a produção extracelular de enzimas oxidativas por fungos endofíticos do gênero Diaporthe