Análise da expressão diferencial de proteases salivares em pacientes com Síndrome de Sjögren

Abstract

A Síndrome de Sjögren (SS) é uma doença autoimune caracterizada por destruição de glândulas exócrinas, principalmente as glândulas salivares e lacrimais. A saliva tem sido relatada como potencial meio de diagnóstico em diversas doenças, por meio da identificação de marcadores e padrões biológicos salivares. O presente estudo tem como objetivo avaliar a expressão diferencial de proteases salivares de indivíduos controle e SS. As amostras de saliva total estimulada de 40 indivíduos foram analisadas em substratos fluorogênicos sintéticos e na presença de inibidores de proteases. Zimografias foram realizada em SDSPAGE 8% copolimerizado com gelatina 0,1% (w/v) e na presença de inibidores de proteases. Amostras de um SDS-PAGE 8% contendo saliva de 9 indivíduos, separadamente (3 controle, 3 SS-primária, 3 SS-secundária), foram processadas e analisadas pelo EASY-nano LC em espectrometria de massas LTQ-Orbitrap Velos. Ainda, ensaios imunoenzimáticos foram realizados para corroborar os demais resultados. Os ensaios enzimáticos resultaram na proteólise mais intensa (p<0,05) de Gly-Pro-AMC em SS e de sua inibição por Sitagliptina, inibidor altamente seletivo de DPP-IV. O ELISA para DPP-IV/CD26 humana corroborou a caracterização proteolítica, exibindo maior intensidade de DPP-IV em SS. Nas zimografias, as bandas de 50 kDa e >220 kDa diferiram em intensidade (p<0,05) entre os grupos avaliados. As bandas de atividade proteolítica foram consideravelmente inibidas por EDTA, inibidor seletivo de MMP. O ELISA para MMP-9 confirmou a presença da protease e exibiu maior expressão (p<0,05) em saliva SS. As serinoproteases elastase neutrofílica, catepsina G e proteinase 3 foram reportadas apenas em saliva de SS, por meio da análise proteômica. Os resultados obtidos em ambos os ensaios sugerem que a atividade proteolítica salivar difere entre os grupos avaliados. Mais estudos são necessários, a fim de melhor compreender o papel das proteases na patogênese da SS.